完成下列相关填空

（一）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。

（1）土壤悬液先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出             。

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行            ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到单菌落，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与           强弱相关。

（3）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中         的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高                的利用率。

（4）利用物理或化学方法将植酸酶固定在          的介质上称为固定化酶。实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作，其中第一次洗涤的目的是除去             。

（二）下图为绵羊多莉克隆过程，请回答有关问题。

（5）步骤1中若要获得较多数量的卵细胞，通常对母羊注射相关激素使其超数排卵。步骤2可通过降低           浓度，实现对乳腺细胞的营养限制性培养，可以得到大量的          期细胞，从而实现细胞分裂同步化。

（6）步骤3中科研人员采用         技术进行细胞融合，步骤4通过胚胎体外培养获得胚胎，待发育至              胚胎时进行移植，通常移植至代孕母羊的          部位。

（7）若要将目的基因导入乳腺细胞中，在扩增目的基因时，除利用PCR技术外，还可将目的基因所在的重组载体导入大肠杆菌中，利用大肠杆菌  ▲ 使其扩增。

（8）为获得大量的上述克隆羊，可用胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为胚胎成纤维细胞可进行           培养，理论上可获得无限只克隆羊。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．

​（6）基因工程的四个操作步骤是___________、____________、____________、和____________。

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）为避免Bt毒蛋白基因通过花粉传播进入其它植物，一般将Bt毒蛋白基因转入棉花细狍的__________（选择填入“细胞核”或“叶绿体”）。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行_______，使其具有更广杀虫范围，属于___________（生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和___________三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设：

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、__________、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的______________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了___________________原理。

（3）下面的结构示意图中，能体现系统学和工程学原理的是(　　)

(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素      ,①过程必须用到      酶,②过程使用的是             酶。④表示基因工程中         过程;若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法,则方法C是           。 

(2)图中采用的生物工程技术A和B分别是指                 和        。 

(3)为实现人血清白蛋白基因在转基因牛E的乳腺细胞中表达，应让该血清白蛋白基因和 的启动子等调控组件结合在一起。如果转基因牛E的牛奶中含有               ,则说明人血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。 

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶               分别对                 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为               种、               种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有               作为标记基因。

（3）研究人员通常采用               法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用               技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的               过程。

请回答下列与基因工程、胚胎工程、生态工程有关的生物学问题：

（1）基因工程技术中获得目的基因后，利用PCR技术将该基因扩增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成 。将目的基因导入微生物细胞采用的方法是 。

（2）体外受精是胚胎工程的重要环节，受精前的准备阶段：取自附睾的精子要进行精子获能；来自母方的卵母细胞要在输卵管内进一步成熟，达到 ，才具备与精子受精的能力。胚胎工程最后一道工序是 （填生物技术名称）。

（3）与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体具有很多优点。在癌症治疗时，把抗癌细胞的单克隆抗体与放射性同位素相结合，制成“生物导弹”，借助单克隆抗体的__________作用，将药物带到癌细胞位置，将其在原位杀死。单克隆抗体的制备过程主要应用了_______________技术

（4）桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程________________的原理。