基因工程的整个过程包括工程菌（细胞）的设计构建和基因产物的生产两大部分。回答有关问题：

（1）基因工程操作中需要使用的工具酶是                            。

（2）基因工程中将外源基因（例如抗除草剂基因）导入受体细胞（例如玉米）中的运载体包括                   （写出2种），运载体必须具备的功能，除了能将外源基因转移到受体细胞中，还必须具备能为外源基因提供在受体细胞中的                  能力。

（3）农杆菌因具有含T-DNA（可转移的DNA）的Ti质粒备受青睐。能将目的基因导入受体细胞的重组Ti质粒又称为              ，其组成至少包括5个不可缺少的DNA序列：除目的基因、终止子外，还有                            （缺一不可）。

（4）获得目的基因（抗除草剂基因）的方法有：以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是                            ；又可通过技术扩增目的基因；还可通过化学方法直接获得              。检测抗除草剂基因导入转基因生物细胞后，是否能稳定维持和表达其遗传特性的方法是                            。

去年冬季我国北方再次爆发流感，专家指出接种流感病毒疫苗仍是预防的有效措施。流感病毒为RNA病毒，M基因编码流感病毒表面抗原（M蛋白）。请回答下列问题：

（1）由病毒RNA通过________________可获得病毒DNA，若要通过PCR技术扩增M基因，前提是设计M基因对应的_____________ 。

（2）构建M基因表达载体所用的工具酶是 ____________________ 。若要将M基因表达载体导入到大肠杆菌细胞内，以大量生产疫苗，通常先用钙离子处理大肠杆菌，其目的是 _______________________。检测M基因是否转录出mRNA的具体方法是使用__________________与提取出的______做分子杂交。

（3）新型疫苗—“DNA疫苗”是将含M基因的重组表达载体直接导入人体内，在人体细胞内通过M基因的表达产生__________，刺激机体通过免疫过程产生_________，以提高机体的免疫能力。

（1）PCR技术利用了_________原理解决了打开DNA双链的问题，从一种细菌中分离到_______，解决了DNA聚合酶失活的新问题。

（2）利用PCR技术从基因文库中提取目的基因时，首先要根据目的基因的核苷酸序列设计并合成出2种引物。在第_________轮开始出现目的基因片段。

（3）试管动物技术正广泛应用于畜牧业生产，此技术中从母牛体内获得的卵母细胞需要到____________________(时期)才能与精子结合。在体外培养受精卵时，需要满足以下条件：_______________、营养、温度和pH以及气体环境。

（4）将外源基因导入小鼠受精卵后，外源基因会随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析:因外源基因的插入导致受精卵死亡的最可能原因_________________。

欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的______________细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是_______（A. 受精卵  B. 胚胎干细胞  C. 第一次卵裂形成的细胞  D. 第三次卵裂形成的细胞）

(2)为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进行________处理，将获得的卵母细胞培养成熟，与经__________处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助____________________、__________________等技术才能成为转基因小鼠。

下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：

（1）过程①使用的         酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的          （化学键）断开。过程②需要用到        酶。运载体的黏性末端与含目的基因的DNA片段的黏性末端上的碱基按照碱基互补原则通过      （化学键）而结合。

（2）图中形成A的过程是_________________（是基因工程的核心步骤），它重组成功的物质基础是干扰素基因的DNA与细菌质粒DNA的结构组成相同。

（3）A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为__________ 。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取  与用放射性同位素标记的____________

____作探针进行分子杂交。

（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因上有一段是已知的核苷酸序列，以便根据这一序列合成      ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和           酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。

（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G↓GATCC—。请画出质粒（部分DNA片段如下图）被切割后形成黏性末端：

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题

（1）图中cDNA文库         基因组文库（选填“大于”或“等于”或“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要         的切割。

（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用的技术是       ，其原理是                。该反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。

（4）目的基因获取之后，需要进行基因表达载体的构建，基因表达载体的组成必须有______         及标记基因等，此步骤是基因工程的核心。

（5）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是         ，检测目的基因是否导入受体细胞、是否翻译出相关的蛋白质时所用的方法分别是_________________、_________________技术进行检测。

下图是用多种生物学工程的方法来培育牛奶中含人乳铁蛋白的奶牛的过程。请回答：

(1)图中的A、B分别代表的技术是            _______________，A中所用培养液的成分除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及          等物质。

(2)为了快速繁育产人乳铁蛋白的奶牛，通过对筛选子代进行核移植。获取的卵母细胞要培养到________________时期才能进行核移植，得到的动物称作_______________________

 (3)在体外胚胎培养时，应选用囊胚的________进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，同时获得更多的相同转基因奶牛，该过程应选择__________________的囊胚或桑椹胚进行操作。若对囊胚进行操作，应注意___________________。

(4)检测人乳铁蛋白基因是否成功表达的方法是                              。