去年冬季我国北方再次爆发流感，专家指出接种流感病毒疫苗仍是预防的有效措施。流感病毒为RNA病毒，M基因编码流感病毒表面抗原（M蛋白）。请回答下列问题：

（1）由病毒RNA通过________________可获得病毒DNA，若要通过PCR技术扩增M基因，前提是设计M基因对应的_____________ 。

（2）构建M基因表达载体所用的工具酶是 ____________________ 。若要将M基因表达载体导入到大肠杆菌细胞内，以大量生产疫苗，通常先用钙离子处理大肠杆菌，其目的是 _______________________。检测M基因是否转录出mRNA的具体方法是使用__________________与提取出的______做分子杂交。

（3）新型疫苗—“DNA疫苗”是将含M基因的重组表达载体直接导入人体内，在人体细胞内通过M基因的表达产生__________，刺激机体通过免疫过程产生_________，以提高机体的免疫能力。

如图所示为用农作物①和②两个品种分别培养出④⑤⑥⑦四个品种的过程．



（1）用①和②通过Ⅰ和Ⅱ过程培育出⑤的过程中，由③自交产生的后代中AA bb占的比例为____．
（2）通过Ⅲ和Ⅴ培育出⑤，该方法培育出的个体都（是/不是）______纯合体．
（3）由③培育出的⑥．该个体体细胞中的染色体组数目是________________个．IV过程需要的处理是_______________________________________。
（4）⑤通过Ⅵ过程培育出⑦的过程所依据的遗传学原理___________________．

下图是用多种生物学工程的方法来培育牛奶中含人乳铁蛋白的奶牛的过程。请回答：

(1)图中的A、B分别代表的技术是            _______________，A中所用培养液的成分除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及          等物质。

(2)为了快速繁育产人乳铁蛋白的奶牛，通过对筛选子代进行核移植。获取的卵母细胞要培养到________________时期才能进行核移植，得到的动物称作_______________________

 (3)在体外胚胎培养时，应选用囊胚的________进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，同时获得更多的相同转基因奶牛，该过程应选择__________________的囊胚或桑椹胚进行操作。若对囊胚进行操作，应注意___________________。

(4)检测人乳铁蛋白基因是否成功表达的方法是                              。

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶的切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶             对含鱼抗冻蛋白基因的DNA进行切割，切割后产生的DNA片段有      种，用限制酶             对质粒进行切割，切割后产生的DNA片段有      种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有                作为标记基因。

（3）研究人员通常采用           法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的            和            过程。

将几丁质酶基因导入棉花细胞中,可获得抗真菌的转基因棉,其过程如下图所示(注:农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。

(1)图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”，其中的核心步骤是__________________。

(2)构建重组Ti质粒用到的工具酶是___________________。 

(3)该几丁质酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码几丁质酶的基因进行了改造，使其表达的几丁质酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了其耐热性。资料中的技术属于                 工程范畴，其基本途径是从预期蛋白质的功能出发，通过           和人工合成的方法获得该基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(4)检验转基因棉的抗菌性状，常用方法是___________________________。

(5)除了图中所示的将目的基因导入受体细胞的方法，还可用_______________或____________方法。

(6)棉花细胞经③④⑤得到试管苗，依据的理论基础是______________________。

下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：

（1）在基因工程中，A→B为       技术。利用的原理是_______，其中a为受热变性(解旋)的过程，其中b过程使用的酶是___________  。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，c过程用到的生物技术主要有动物细胞培养和__________________技术。在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO₂，其主要作用是  _________________________     。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中d过程常用的方法是  _______        。要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作。请写出在个体水平上的鉴定过程       _ _______   _____ _______      。