科学家将鼠体内的能够产生胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中发现了胰岛素。如下图所示，请据图回答下列问题。

（1）图中②⑤③⑦表示通过_____________________________________________的途径，获得__________________的过程。

（2）图中③代表__________________，在它的作用下将_____________和___________切成______________________________末端。

（3）经⑨__________________的作用将⑦和⑥“缝合”形成⑧_________DNA分子。⑧往往含有_________基因，以便将来检测。

（4）⑪表示⑧随大肠杆菌的繁殖而进行_________。

（5）如在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素，说明___________________________________。

某实验室做了下图所示的实验研究,请据图回答:

(1)与纤维母细胞相比,过程①形成的诱导干细胞的全能性较_____________。 

(2)过程②是诱导干细胞中基因_____________的结果。 

(3)过程③需要用_____________进行筛选,得到的Z细胞还需进行_____________培养和_____________,经多次筛选,就可以得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 

(4)科学家找到一种“无限增殖调控基因”能激发细胞不断分裂,通过基因工程技术将该基因导入待定的_____________细胞(填细胞名称),来制备单克隆抗体,基因导入并成功表达后,该细胞将具有__________________________的特点,在上述操作中用到了PCR扩增仪,其作用是_____________。 

(1)上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_____________，切割后产生了__________末端。

(2)利用EcoRI和NaeI酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRI和SmaI酶切后的质粒连接成重组质粒，原因是_________________________________。

(3)重组质粒导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用______________作探针。

(4)利用抗冻蛋白制备出相应的__________，然后进行抗原—抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此，还应将转基因番茄___________________________________以确定其耐寒能力是否提高。

复合型免疫缺陷症(SCID)患者缺失ada基因。利用基因疗法将人正常ada基因转入患者自身T细胞，可改善患者的免疫功能。如图显示该基因疗法的两个关键步骤。回答下列问题：

(1)图中所示获取正常ada基因的方法是______________________，若要大量获取该基因，可通过PCR技术进行扩增。与细胞内DNA复制过程相比，PCR技术的不同点有________________________________。

(2)步骤②是______________________。在该步骤中，病毒作为__________起作用，需使用的工具酶有______________________。

(3)完成步骤②后，在将该T细胞重新输入患者体内之前，还必须完成哪两项操作？____________________________________。

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

(1)图中进行的是________(填“体内”或“体外”)基因治疗，该过程利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和________等。

(2)ES细胞是由早期胚胎或________中分离出来的一类细胞，利用其具有________ 性，可以将其培养成人体各种组织器官。

(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的________，该结构除了复制原点外，至少包含____________________和干扰素基因等，为检测干扰素基因是否表达，可以采用____________________的方法。

(4)为了快速获得更多的目的基因常常采用________技术进行扩增。

利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。科研人员通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白，其技术路线如图所示。请回答下列问题：

(1)基因工程的第一步是获取目的基因。目的基因可以从自然界已有的物种中分离，也可以人工合成。可以通过________技术扩增目的基因。利用该技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、____________、4种脱氧核糖核苷酸和模板(人凝血因子Ⅸ基因)。

(2)图中过程①为基因工程的核心，则A表示的结构是________。将A导入绵羊胎儿成纤维细胞的常用方法是________________。筛选整合有目的基因的成纤维细胞时，常用的检测方法是____________。

(3)欲获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，可用________酶处理绵羊组织块。图中所用的去核卵母细胞一般处于____________期。

(4)进行胚胎移植时，代孕母羊需要注射激素，以实现____________。

  (1)对①需要剪碎并使用__________________使其彼此分散，用于传代培养的细胞应不超过10代以保证细胞的___________________________________不发生变化。

  (2)在胚胎的早期培养过程中把⑤送入⑥的最佳时期是_____________________________。

  (3)在此过程中涉及的细胞工程技术手段有________________________________(答两种)。

  (4)过程②中，重组质粒中调控目的基因表达的组件是_______________，________的作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞。

  (5)要实现⑦批量生产血清白蛋白，要求③的性染色体组成是______。⑦和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物，这类转基因动物被称为____________________。

转基因草莓中有能表达甲肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防甲肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，甲、乙、丙代表结构或细胞）

（1）这种新型疫苗，在免疫学中属于         。

（2）据图分析，获取目的基因时，应使用限制酶     ；切割质粒时，应使用限制酶     ；成功建构的重组质粒上含有     个限制酶C的识别位点。

（3）为了确保目的基因的表达，Ti质粒上应具有                       。该培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法是               。

（4）从离体的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，发生了（  ）

①无丝分裂②有丝分裂③减数分裂④植物体细胞杂交⑤细胞融合⑥脱分化⑦再分化 

A．①④⑤⑦   B. ②④⑤⑥⑦   C．②⑥⑦  D．③④⑥

（5）甲肝病毒表面抗原基因是否插入到了受体细胞的染色体DNA上，通常采用            的方法进行检测。

如图为以二倍体水稻（2N=24）为亲本的几种不同育种方法示意图。请据图回答：

（1）B常用的方法是______________。C、F过程常用的药剂是______________，该药剂的主要生理作用是______________。

（2）突破物种生殖隔离界限的育种方法是            （用图中的字母表示），该方法所遵循的原理              。

（3）假设你想培育一个能够稳定遗传的二倍体水稻品种，若它的优良性状都是由隐性基因控制的，则最简单的育种方法是______________（用图中的字母表示）；如果其优良性状都是由显性基因控制的，为缩短育种时间常采用的方法是______________（用图中的字母表示）。

（4）现有三个水稻品种，①的基因型为aaBBDD，②的基因型为AAbbDD，③的基因型为AABBdd，三对等位基因分别位于三对同源染色体上。如果每年只繁殖一代，若要仅采用杂交育种的方法获得aabbdd植株，至少需要_______年的时间。

23．(5分）下图表示科学家培养转绿色荧光蛋白基因植物的过程，请回答：

(1)利用打孔器从植物叶片上取多个大小相等的小圆片接种在培养基上，与重组农杆菌共培养一昼夜，为筛选出被农杆菌感染的小圆片，作为运载体的Ti质粒应含有________，运载体上的________是驱动基因转录的酶识别和结合的位点。

(2)图中小圆片周围长出的结构A称为________，此后更换培养基时调整组分比例，A经图中④长出B结构，再经⑤和⑥形成植株的过程称为________。本实验可使用特殊的仪器在A中检测目的基因的表达情况，请预测观察到的现象是______________________________ __________________________________________。