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葡萄酒酵母(C1)具有良好的发酵性能,但分解苹果酸能力差,过多的苹果酸会使葡萄酒有酸涩感,解苹果酸裂殖酵母(M1)具有极强的降解苹果酸能力,但发酵性能极差。为了培育新型酵母菌菌种,科研人员采用了以下步骤进行育种。请分析回答:
图1 酶浓度对C1原生质体形成与再生的影响 表 亲本及融合子细胞体积和DNA含量的比较
菌株 | 细胞体积 /μm-3 | DNA含量/ (×2×10-3 μg·cell-1) |
亲 本 | M1 | 31.77 | 2.68 |
C1 | 22.03 | 1.55 |
融 合 子 | Z2 | 45.23 | 3.21 |
Z5 | 43.23 | 3.42 |
Z13 | 46.21 | 4.01 |
Z15 | 38.14 | 3.87 |
Z19 | 49.14 | 4.11 |
Z21 | 34.45 | 2.82 |
Z29 | 47.54 | 3.68 |
(1) 步骤一:制备原生质体。培养C1、M1单倍体亲株,加入一定量的0.5%的蜗牛酶液,保温处理一段时间,在一定浓度的高渗缓冲液洗涤,以确保获得更多的原生质体。
①本实验中,蜗牛酶液的作用是_。
②在无菌条件下,用____(A:高渗缓冲液、B:低渗缓冲液、C:生理盐水)洗涤,以确保获得更多的原生质体。
③改变蜗牛酶液浓度进行多组实验,结果见图1,分别计算酶浓度为1和1.5时的形成率与再生率,相比较酶浓度为____时更适宜。
(2) 步骤二:诱导原生质体融合。取C1、M1原生质体悬浮液等量混合,离心去除上清液,加入一定量40%的____溶液,30 ℃保温20 min,镜检并观察融合情况。
(3) 步骤三:融合子的鉴定。测定细胞体积及DNA含量,结果见表1,从中挑选出融合子Z13、Z15、Z19、Z29,理由是__________________。
(4) 步骤四:融合子发酵性能的测定。测定融合子与亲株的降糖能力和降酸能力,图2和图3是对Z29和亲株的测定结果,据图分析可以得出的结论是________的降糖能力和降酸能力均较好,表明________________。
图2 融合子Z29与亲株发酵降糖能力的比较 
图3 融合子Z29与亲株总酸降解能力的比较