为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据，科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响，分析回答：

①卵母细胞的收集和体外培养：从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞，随机分成5组，分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中，在恒温的培养箱中培养22-24h。

②卵母细胞成熟判断：在显微镜下观察卵母细胞，判断其是否成熟，统计结果如表。

③体外受精：在受精溶液中进行体外受精后，用显微镜观察判断是否完成受精。

④早期胚胎培养：将受精卵移入胚胎培养液中培养44-48h后检查分裂情况，每隔48h更换一次培养液，第5-9天观察囊胚发育情况。

如表亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟的影响

（1）步骤①中，细胞培养箱中加5%CO₂的作用是____________。

（2）步骤②中，卵母细胞发育到____________时期才能与获能的精子受精；步骤③中，判断是否受精的依据是____________。

（3）步骤④中，受精卵经过卵裂期、____________（时期）发育成囊胚，培养过程定期更换培养液的目的是____________。

（4）根据实验数据分析，亚麻酸溶液为200μmol·L^-1时，对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起____________作用（填“促进”、“抑制”）。

（5）将囊胚移植到受体（代孕母牛）子宫内，最终生出的犊牛和受体遗传上有无亲缘关系？____________原因是___________

____________。

用医学手段培育“三亲婴儿”可以解决遗传基因带来的缺陷，其培养过程如图所示．请据图回答有关问题：

（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前需要注射________激素，促使一次有更多的卵泡发育。重组细胞体外培养所需的气体主要是O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________。

（2）从受精卵到三亲婴儿的培养还需要______和______等技术。三亲婴儿的培育方式属于____________生殖．

（3）三亲婴儿的培育技术______（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代。三亲婴儿的染色体______（填比例）来自母亲提供的细胞核．设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行_____________________。

现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质，利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱，请完成下列实验报告。

I．实验材料：小白鼠胚胎。

Ⅱ．药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。

Ⅲ．实验原理：________________________________________________，根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。

Ⅳ．实验步骤：

（1）制备细胞悬液：把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬液。

（2）进行细胞培养：

①取标记好的A、B、C三个洁净的培养瓶，______________________________。

②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，___________，并将培养瓶摇匀。

③把三个培养瓶放在37℃（适宜温度）的细胞培养箱中培养。

（3）制作临时装片：

①当细胞繁殖到大约第8代左右时，同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液迅速杀死细胞，将细胞固定在不同的分裂时期。

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央，加1-2滴一定浓度的 __________ 染色，3-5 min后，盖上盖玻片，制成临时装片。

（4）镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于 _______  期的细胞，并与 小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片对比以确认发生上述变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数（Q值）。

V．实验结果：

Ⅵ．实验结论： ___________________________________________

    (一)要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：

    (1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是__________，为调节渗透压，要加入一定量的___________。为进行大肠杆菌的分离，还要加入琼脂配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。

    (2)获得纯净微生物培养物的关键是_____________________，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用_____________________法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须_________________________，以防止空气中的杂菌污染。

    (3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12小时。菌种的分离时一般在固体培养基上采用____________法，并将培养皿_______________状态。

    (二)科学家将蜘蛛的蛛丝基因导入山羊体内，创造出转基因山羊，使羊奶中含有一种独特的蛛丝蛋白。生产原理如下图。请回答：

    (1)将蛛丝蛋白基因和质粒通过甲过程形成的X物质为_____________。如果选取的受体细胞为体细胞，当在培养过程中出现接触抑制现象时，需要进行____________培养。要使重组细胞具有发育的全能性，乙过程需要的技术操作是____________。

    (2)下列关于丙过程的叙述，正确的是______。

    A．该过程为动物细胞培养，目的是获得更多的重组细胞

    B．该过程所用培养液的成分往往是相同的

    C．该过程在无菌条件下进行，需要提供CO₂来调节pH

    D．通过现代生物技术可以将重组细胞在体外培养成山羊个体

    (3)为了快速繁殖转基因山羊，还可在丁过程前对早期胚胎进行____________，经培养后再分别移植到____________________的代孕母羊的相应部位。

如图所示为动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线（图 中 B、D 两点表示经筛选后继续培养）,据图回答问题。

​

（ 1 ） OA 段 的 培 养 称 为_________________________________培 养 ， AB 段 可 能 发 生 了_______________________________现象，需要用_______________________________酶处理使组织细胞分散开来。

（2）动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细 胞都要进行_______，不同的是植物细胞还要进行____________。

（3）为制备单克隆抗体，需将_______________________________注射到小鼠体内，以此获取相 应的 B 淋巴细胞，同时可选取图中_____________________________________________________________________________________点以后的细胞与该细胞融合 形成杂交细胞。这种杂交细胞的特点是___________________________________________________________________________________________。

（4）在制备单克隆抗体的过程中，需要经过两次筛选，第一次是诱导融合之后筛选出_______________________________细胞，第二次是筛选出_______________________________细胞。

现代生物工程技术推动了医药学、免疫学和生态学的发展，如科学家将人的血清蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产出人的血清蛋白等。

（1）从牛的组织获得单个细胞，通常需要用______________酶处理。

（2）将人血清蛋白基因导入牛的常用的方法是_______________。在导入之前，要用_____________酶构建基因表达载体，导入后再将受精卵送入母体的输卵管，受精卵即在输卵管内进行___________，开始发育。

（3）上述胚胎发育早期是在____________内进行的，这个时期称为卵裂期。在胚胎发育过程中，囊胚的___________将发育成转基因牛的各种组织。

（4）为了要泌乳，必须保证移植的胚胎为______性，一般的做法是取样_________做DNA分析性别鉴定。当转基因动物进入泌乳期时，可通过分泌的乳汁来生产人血清蛋白，因而称为_______________。

（5）单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，再用特定的___________培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行___________培养和抗体检测，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。最后获得的杂交瘤细胞只能产生一种单一抗体的原因是___________。

（6）为建设美丽乡村，积极推进生态农业建设，依据生态工程___________的原理，合理设计食物链，使生态系统中的物质和能量得到分层次多级利用，使废弃物资源化，提高了能量的___________，减少了环境污染。

【加试题】蓝莓果实中富含花青素，研究表明花青素对癌细胞的增殖具有一定的抑制作用。为了研究不同浓度、不同时间的花青素的抑制效果，请利用以下材料进行探究。

实验材料：癌细胞悬液（含培养液）、蓝莓花青素（浓度200μg/ml)、生理盐水、卡氏瓶、血细胞计数板、显微镜等。

(要求与说明：2天内每隔12小时计数一次，计数具体操作过程不作要求；癌细胞置于卡氏瓶中培养；实验条件适宜）

(1)实验思路：

……

(2)请设计一个表格用于记录实验数据。

(3)①除了利用血细胞计数板对癌细胞进行计数外，也可以利用__________测定癌细胞培养液的浑浊度。

②分析数据时，发现某个花青素浓度下的一组实验数据存在明显的偏差，如何处理？__________。

A.保留，继续求平均值B.舍弃，其他组别求平均值

C.重新实验得到实验数据D.取中间值

利用小鼠制备的抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕试剂盒”，检测早孕的准确率在90%以上。请回答该“单抗”制备的有关问题：

(1)单克隆抗体与常规的血清抗体相比。最大的优越性是______________。

(2)在该“单抗”的生产过程中，将__________________作为抗原对小鼠进行注射。

(3)对小鼠注射特定抗原后，可从小鼠体内脾脏中得到相应的____________细胞，设法将鼠的骨髓瘤细胞与该细胞融合，常用诱导融合剂______________处理,再用特定的选择培养基对融合细胞进行筛选，选出的是____________；大规模培养前对该细胞还需进行细胞培养和__________检测，经多次筛选，可获得足够数量的符合需要的融合细胞。该融合细胞的特点是: _______________________。

(4)得到的杂交瘤细胞一般采用体内培养和体外培养两种方式进行培养，体外培养对环境条件的要求比较高，除了需适宜的温度和PH、一定的营养和气体条件外，还需满足的条件有：____________。

欲研究药物乙对海拉细胞增殖的抑制作用，请根据以下提供的材料与用具，以海拉细胞的细胞数变化为测定指标，完善实验分组设计和实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

材料与用具：海拉细胞悬液，药物甲溶液（对细胞增殖有促进作用），药物乙溶液，培养液、培养瓶，血细胞计数板，显微镜等。

（要求与说明：细胞计数的具体操作过程不做要求，不考虑加入溶液对体积的影响，实验条件适宜）

回答下列问题：

（1）实验分组设计：

A组：海拉细胞悬液+培养液

B组：海拉细胞悬液+培养液+__________

C组：海拉细胞悬液+培养液+药物甲溶液，培养一段时间后，加入________________

（2）完善实验思路：

 ①取等量细胞悬液分别加入到含等量培养液的培养瓶中，用________________在显微镜下计数并记录

②将_______海拉细胞悬液分别加入到A、B、C三组培养瓶中进行培养

③每隔一段时间分别测定三组培养瓶中的______并记录

④当细胞增殖达一定数量时，向C组中加入药物乙溶液

⑤重复③，对所得数据进行______

（3）预测实验结果（以坐标曲线图形表示实验结果，并标出加入药物的时间）

骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下：

步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5% CO₂培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。

步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～200 ng·mL^-1）的培养基继续培养24h。

步骤3 对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。

步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL^-1、25 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。分析回答：

（1）与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移，其主要原因是                            。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是                     ，细胞培养箱中保持5% CO₂的作用是                  。

（2）步骤2中，设置0 ng·mL^-1 TSA实验的主要目的是                         。

（3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是                                  。

（4）图1所示结果表明                                  。

（5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中          基因过度表达会加速细胞凋亡。