图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列有关现代生物科技的问题：

(1)糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素治疗方法。基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是________________，该酶的作用是__________________，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。

(2)蛋白质工程的基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸的序列→找到相对应的________序列。

(3)单克隆抗体的制备过程中，经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的B淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行________________。

(4)．分析有关基因表达的资料，回答问题。

取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图1。

               图1                                                 图2

a.现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是__________。

b.图2是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是________。

A. HindⅢ           B. EcoRⅠ          C. EcoB          D. PstⅠ

c.新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行________，才能确定受体细胞已含有目的基因。

人感染埃博拉病毒(EV)会引起致命的出血热。为了寻找治疗EV病的有效方法，中外科学家进行了系列研究。

                     图1                                                        图2

                                          图3

(1)EV表面的糖蛋白(EV-GP)作为________刺激机体产生________性免疫反应。

(2)科学家采集了多年前感染EV并已康复的甲、乙两人的血液，检测抗EV-GP抗体的水平。据图1，应选取________的血液分离记忆B细胞用以制备单克隆抗体(单抗)。

(3)将制备的多种单抗分别与病毒混合，然后检测病毒对宿主细胞的感染率。据图2，抑制效果最好的两种单抗是______________。

(4)EV-GP具有多个与抗体结合的位点。为了研究上述两种单抗(分别称为A、B)与EV-GP结合的位点是否相同，可按图3所示简要流程进行实验。

①请将图3中应使用的抗体填入下表ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ处(填“A”“B”或“无关抗体”)，完成实验方案(一种即可)。

②若A、B与EV-GP结合的位点不同，与对照组1、2分别比较，实验组的荧光值应____________________________________。

(5)中国科学家用分子结构成像技术证实了A、B与EV-GP 结合的位点不同。基于上述系列研究，请你为治疗EV病提供一种思路：_________________。

科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答：

(1)利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、________、电激等诱导因素诱导动物细胞融合。经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行________和________，经多次筛选以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：

①取________细胞的细胞核，移植到去核的________细胞中，构成重组细胞。

②将重组细胞在________条件下做大规模培养或注射到小鼠________内增殖，以获得大量单克隆抗体。

(3)也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。

①酶A是指________，酶B是指__________________________。

②图中Ⅰ表示________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是______________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是_______________。

下图表示利用经抗原免疫后的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行杂交，制备单克隆抗体的过程。请据图回答下列问题：

（1）在单克隆抗体的制备过程中，应用了细胞工程中的____________和_________两大技术。

（2）杂交瘤细胞具有___________特点；单克隆抗体具有_______________________的优点。

（3）培养杂交瘤细胞的培养基中需加入动物血清，原因是___________；培养的杂交瘤细胞不会出现接触抑制现象，为什么？_____________。

（4）对筛选出来的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法,即稀释细胞到3～10个细胞/mL，每孔加入细胞稀释液_     __          _mL(填"0.1""1"或"10"),使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

（5）单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(如癌变细胞等)并与之结合，而不攻击正常细胞，故可制成“生物导弹”，这是利用了_______的原理。

如图所示为动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线（图 中 B、D 两点表示经筛选后继续培养）,据图回答问题。

​

（ 1 ） OA 段 的 培 养 称 为_________________________________培 养 ， AB 段 可 能 发 生 了_______________________________现象，需要用_______________________________酶处理使组织细胞分散开来。

（2）动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细 胞都要进行_______，不同的是植物细胞还要进行____________。

（3）为制备单克隆抗体，需将_______________________________注射到小鼠体内，以此获取相 应的 B 淋巴细胞，同时可选取图中_____________________________________________________________________________________点以后的细胞与该细胞融合 形成杂交细胞。这种杂交细胞的特点是___________________________________________________________________________________________。

（4）在制备单克隆抗体的过程中，需要经过两次筛选，第一次是诱导融合之后筛选出_______________________________细胞，第二次是筛选出_______________________________细胞。

现代生物工程技术推动了医药学、免疫学和生态学的发展，如科学家将人的血清蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产出人的血清蛋白等。

（1）从牛的组织获得单个细胞，通常需要用______________酶处理。

（2）将人血清蛋白基因导入牛的常用的方法是_______________。在导入之前，要用_____________酶构建基因表达载体，导入后再将受精卵送入母体的输卵管，受精卵即在输卵管内进行___________，开始发育。

（3）上述胚胎发育早期是在____________内进行的，这个时期称为卵裂期。在胚胎发育过程中，囊胚的___________将发育成转基因牛的各种组织。

（4）为了要泌乳，必须保证移植的胚胎为______性，一般的做法是取样_________做DNA分析性别鉴定。当转基因动物进入泌乳期时，可通过分泌的乳汁来生产人血清蛋白，因而称为_______________。

（5）单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，再用特定的___________培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行___________培养和抗体检测，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。最后获得的杂交瘤细胞只能产生一种单一抗体的原因是___________。

（6）为建设美丽乡村，积极推进生态农业建设，依据生态工程___________的原理，合理设计食物链，使生态系统中的物质和能量得到分层次多级利用，使废弃物资源化，提高了能量的___________，减少了环境污染。

细胞融合技术有着广泛应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题

（1）若a、b分别是基因型为yyRr和YYrr两个玉米品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。科学家分别将它们的花粉除去细胞壁，然后诱导其融合，再把这些融合细胞进行培养，培育出了玉米新品种。

 ①这两个品种的花粉可用化学诱导剂诱导融合，共可产生___________种基因型的融合细胞（仅考虑两两融合），这些融合细胞经过____________技术可以得到玉米新品种。

 ②若想培育出基因型为yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr植株的花粉培养得到__________幼苗，再经过__________处理并筛选获得，这种方法叫做________。

（2）若a、b表示番茄和马铃薯两种植物的体细胞，a、b细胞融合之前，要纤维素酶和果胶酶酶处理后得到_________________；诱导植物细胞融合的化学方法是_________________。

（3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞，请据图回答：

  ①为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的d细胞，其特点是_________。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有_______________________等特点。

   ②下列各图表示单隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来_______________。

①骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

②骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体

③B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

④B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体

利用小鼠制备的抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕试剂盒”，检测早孕的准确率在90%以上。请回答该“单抗”制备的有关问题：

(1)单克隆抗体与常规的血清抗体相比。最大的优越性是______________。

(2)在该“单抗”的生产过程中，将__________________作为抗原对小鼠进行注射。

(3)对小鼠注射特定抗原后，可从小鼠体内脾脏中得到相应的____________细胞，设法将鼠的骨髓瘤细胞与该细胞融合，常用诱导融合剂______________处理,再用特定的选择培养基对融合细胞进行筛选，选出的是____________；大规模培养前对该细胞还需进行细胞培养和__________检测，经多次筛选，可获得足够数量的符合需要的融合细胞。该融合细胞的特点是: _______________________。

(4)得到的杂交瘤细胞一般采用体内培养和体外培养两种方式进行培养，体外培养对环境条件的要求比较高，除了需适宜的温度和PH、一定的营养和气体条件外，还需满足的条件有：____________。