人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:

(1)htPA基因与载体用 切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用      技术。 

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射 ，使其     。采集的精子需要经过 才具备受精能力。 

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是     。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎，这体现了早期胚胎细胞的 。 

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 

[生物——选修3：现代生物科技专题]

   据报道，尽管存在巨大争议，世界上首例“三亲婴儿”仍然于2016年4月在墨西哥诞生。三亲婴儿的培育技术路线如下。

回答下列问题：

（1）三亲婴儿培育技术中，过程A使用的技术是________；在体外受精前需对精子进行________处理；由“受精卵→三亲婴儿”过程中，需用到的胚胎工程技术有早期胚胎培养和________。

（2）利用三亲婴儿培育技术可以避免三亲中________（填“捐献者”、“母亲”或“父亲”）中的________（填“常染色体上”、“性染色体上”或“线粒体中”）的基因缺陷传给孩子。

（3）三亲婴儿与体细胞克隆动物多利羊在遗传物质来源上的主要区别是________。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

［生物——选修3：现代生物科技专题］

据报道，尽管存在巨大争议，世界上首例“三亲婴儿”仍然于2016年4月在墨西哥诞生。三亲婴儿的培育技术路线如下。

 回答下列问题：

（1）三亲婴儿培育技术中，过程A使用的技术是                            ；在体外受精前需对精子进行                处理；由“受精卵…→三亲婴儿”过程中，需用到的胚胎工程技术有早期胚胎培养和                           。

（2）利用三亲婴儿培育技术可以避免三亲中          （填“捐献者”“母亲”或“父亲”）中的                 （填“常染色体上”、“性染色体上”或“线粒体中”）的基因缺陷传给孩子。

（3）三亲婴儿与体细胞克隆动物多利羊在遗传物质来源上的主要区别是                                                    。

[生物——选修1：生物技术实践]

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用__________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶分微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以___________为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用__________法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_________℃设计后续实验。

【生物——现代生物科技专题】

人的血清蛋白有广泛的药用价值，科学家通过培育乳腺生物反应器生产人血清白蛋白，流程如下：

(1)在基因工程中，①被称为__________________。若①因数量少而不能满足生产需要，常利用___________________技术进行扩增。

(2)②应该取自__________(雄性或雌性)荷斯坦奶牛，由②到③的过程中，需将②用_____________处理后进行培养。

(3)从③到④的过程中，用于核移植的供体细胞③一般都选用传代10代以内的细胞，原因是______________；作为受体细胞的卵母细胞需培养至____________期；形成④时常通过______________(物理方法)进行激活，使其完成分裂和发育进程。

(4)④培养至⑤后，可通过___________技术获得多个⑥，从而提高胚胎的利用率。胚胎移植的实质是___________________________________________________。

【生物—选修3：现代生物科技专题】

回答下列问题：

（1）三亲婴儿培育技术中，过程A使用的技术是______________；在体外受精前需对精子进行______________处理；由“受精卵→三亲婴儿”过程中，需用到的胚胎工程技术有早期胚胎培养和_________________。

（2）利用三亲婴儿培育技术可以避免三亲中____________（填“捐献者”、“母亲”或“父亲”）的____________（填“常染色体上”、“性染色体上”或“线粒体中”）的基因缺陷传给孩子。

(1)过程②常用的发酵菌是________，在苹果酒的基础上制作苹果醋时，需要________(填“升高”、“降低”)温度，同时还需要适当________．

(2)该发酵菌种可以从食醋中分离获得．若用平板划线法分离该发酵菌，接种结束后，对接种环还要进行一次________灭菌，是为了________．

(3)对该发酵菌进行扩大培养时，将其接种到液体培养基中并混匀，然后分为甲乙两组．甲组进行静置培养，乙组进行振荡培养，结果发现________组培养的发酵菌生长速度快，原因是________、________．

2 近年来，有科学家把来自于动物体的精子注入到去掉DNA的卵细胞中，获得重组细胞，进一步培育出“孤雄单倍体胚胎”．

(1)该过程用到的技术手段主要有________、________．

(2)将重组细胞培育为胚胎的过程中，除必要的营养条件、适宜的pH和温度外，还需保证其处在________的环境下，同时提供一定量的O₂和CO₂，其中CO₂的主要作用是________．

(3)科学家发现成活的“孤雄单倍体胚胎”细胞中含有的性染色体均为X染色体，分析可能的原因是________．拿出任何一个“孤雄单倍体胚胎”细胞，都可当作精子使用，使卵细胞受精，并生下正常小鼠，可能的原因是________．

(4)有人认为这种“人造精子”的基因可以被加工，比如敲除或增加某个基因，这使得科学家能方便地制造出实验所需要的小鼠模型，该过程用到的工具酶主要有________、________．

（1） 由过程①获得的A为____________；过程①中需用到的酶有____________；过程①中，PCR扩增人凝血因子IX基因前需根据已知的一小段核苷酸序列合成出________。

（2） 利用A中的_________基因特性来筛选鉴定出含有人凝血因子IX基因的成纤维细胞。

（3） 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

（1）基因工程中，A→B利用____________技术，依据的原理是__________，其中①为__________过程。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中③用到的生物技术主要有动物早期胚胎培养和____________。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是____________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：_____________________。

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(1)蜘蛛丝基因能在山羊体内成功表达的原因是________，常用山羊胚胎干细胞作为受体细胞的原因是________。

(2)为提高胚胎的利用率，可对囊胚进行________获得二分胚；同时，可以通过取样________(“滋养层”、“内细胞团”)细胞进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。将囊胚移人代孕山羊体内属于

________技术．此技术对代孕受体的要求是________。

(3)可将蜘蛛丝基因导入受精卵，使蜘蛛丝基因整合到山羊DNA中．为得到较多的受精卵，需用________处理供体雌羊。为鉴定蜘蛛丝基因是否成功表达，常用________技术进行检测。