人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:

(1)htPA基因与载体用 切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用      技术。 

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射 ，使其     。采集的精子需要经过 才具备受精能力。 

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是     。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎，这体现了早期胚胎细胞的 。 

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

[生物——选修1：生物技术实践]

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用__________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶分微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以___________为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用__________法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_________℃设计后续实验。

【生物——现代生物科技专题】

人的血清蛋白有广泛的药用价值，科学家通过培育乳腺生物反应器生产人血清白蛋白，流程如下：

(1)在基因工程中，①被称为__________________。若①因数量少而不能满足生产需要，常利用___________________技术进行扩增。

(2)②应该取自__________(雄性或雌性)荷斯坦奶牛，由②到③的过程中，需将②用_____________处理后进行培养。

(3)从③到④的过程中，用于核移植的供体细胞③一般都选用传代10代以内的细胞，原因是______________；作为受体细胞的卵母细胞需培养至____________期；形成④时常通过______________(物理方法)进行激活，使其完成分裂和发育进程。

(4)④培养至⑤后，可通过___________技术获得多个⑥，从而提高胚胎的利用率。胚胎移植的实质是___________________________________________________。

【生物-选修3：现代生物科技专题】

杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如图所示，请据图回答问题：

（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其              。采集的精子需要经过     ，才具备受精能力。判断卵细胞是否受精的重要标志是         。

（2）在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入       等一些天然成分，还需要提供CO₂以维持    。

（3）在胚胎移植前要对接受胚胎的当地普通绵羊进行      处理。代孕母羊对置入子宫的早期胚胎基本上不发生          ，这就为早期胚胎在代孕母羊体内的的存活提供了可能。

（4）采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对胚胎进行分割时，要特别注意将      均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。

为了加快优良种猪的繁殖速度，科学家采用了以下方法，请根据图示信息回答有关问题：

（1）与一般的繁殖良种动物的方法相比较，该方法的优势是________；操作中，常用的激素有________（填字母）。

  a．促性腺激素   b．雌激素   c．孕激素   d．雄性激素

（2）为了保证③过程的顺利进行，必须满足的两个条件是来自父方的精子要进行________，来自母方的卵细胞要培养至________。当一个精子进入卵细胞后，会激发透明带反应等，其意义是________。

（3）⑤过程能够成功进行的生理学基础是________。若需要一次产生多头优良种猪，可将早期胚胎进行________处理，处理的时期是桑椹胚或囊胚期；同时可取样滋养层做________进行性别鉴定。

​

(1)蜘蛛丝基因能在山羊体内成功表达的原因是________，常用山羊胚胎干细胞作为受体细胞的原因是________。

(2)为提高胚胎的利用率，可对囊胚进行________获得二分胚；同时，可以通过取样________(“滋养层”、“内细胞团”)细胞进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。将囊胚移人代孕山羊体内属于

________技术．此技术对代孕受体的要求是________。

(3)可将蜘蛛丝基因导入受精卵，使蜘蛛丝基因整合到山羊DNA中．为得到较多的受精卵，需用________处理供体雌羊。为鉴定蜘蛛丝基因是否成功表达，常用________技术进行检测。

下图是科学家研究良种奶牛快速繁殖的过程示意图。

请据图回答下列问题：

（1）克隆牛G的性别是         。

（2）从良种公牛A采集的精子，需经               处理，才能穿入到卵细胞内部。对良种母牛B进行激素处理的目的是        。

（3）为了获得多个基因型相同的后代，可对早期胚胎进行         。

（4）胚胎移植中，需要对受体D牛进行         处理，以保证胚胎能够在受体的子宫着床、继续生长发育。

（5）克隆牛G的遗传性状与母牛B基本相同，但又不完全相同。下列有关其差异形成原因叙述中不恰当的是           。

A．克隆牛G部分性状遗传自母牛F     B．克隆牛G的细胞质基因来自母牛C

C．发育过程可能发生可遗传变异       D．受环境因素的影响

、下图是科学家通过不同方法培育优良种牛的过程，其中①－⑤表示操作过程。回答以下问题：

（1）图中①在体外进行时必须对精子用一定浓度的化学药物进行________处理；卵子完成受精的标志是____________。

（2）胚胎分割时要平均分割的是_____（填图中字母），取样____(填图中字母)做DNA分析鉴定性别。

（3）图中②过程常用的方法是________。外源基因插入到牛受精卵中的DNA上后，需要利用_____________和___________技术操作最终培育得到转基因牛A。

（4）良种奶牛激素处理的目的是__________。

(1)用              对供体进行超数排卵处理，获得更多的卵母细胞，

(2)冲卵实质上是用特定装置将供体母牛子宫内的________      冲洗出来。

(3)图中数字标号1代表的结构名称是         。标号3为________，标号3将来发育为               。

(4)若想同时获得多个完全相同的子代，在胚胎移植前应进行                      ，应选在                              时期的胚胎进行此项操作，后者进行此操作时应注意                       。胚胎移植的方法有           和              

(5)受体母牛必须和供体牛属于同一物种。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是_                                                                       

(6)试管牛和克隆牛的培育过程中，试管牛是________生殖，克隆牛是________生殖。

41.中科院动物研究所已培育出中国首例转基因猕猴。这一研究成果标志着中国科学家在灵长类转基因动物研究方面达到世界领先水平。下图是转基因猕猴培育过程，据图回答:

(1)过程②中常用            __技术将目的基因导入受精卵，在体外培养受精卵时，为了维持无菌环境，通常向培养液中添加                 。

(2)如果⑤过程在体外进行，那么卵母细胞需要培养到             期，精子需要获能。受精过程中精子头部接触卵细胞膜时产生              反应，以防止多精入卵。

(3)受精卵发育到          期，开始发生分化。

(4)图中⑦过程称为             ，胚胎在代孕雌猴子宫中能够存活的原因是               。

(5)若要同时获得多只与此转基因猕猴相同的小猴，可采用_______技术。