治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程如下：

（1）过程①采用的是细胞工程中的__________技术，过程②采用的是胚胎工程中的_____技术。

（4）胚胎干细胞可以来自于囊胚中的___________。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体_____（填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）过程①获得重组胚胎之前需要通过__________________技术获得重组细胞，接受细胞核的去核卵母细胞应该处于___________________时期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_______________分离出ES细胞。步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________________。

（3）将基因导入ES细胞常用的方法是________________________。体外诱导ES细胞向不同方向分化是利用了ES细胞的_________________。

（4）为检测干扰素基因的表达情况，可采用__________________方法，若有杂交带出现，表明目的基因已成功表达。

为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示回答下列问题。

(3)在受精的过程中，精子入卵后会立即发生一种反应叫_______反应，以防止多精入卵受精。判断卵子是否受精的标志通常是______________________。

(4)要培育高产奶率的转基因牛，如建立生产生长激素的乳腺生物反应器，科学家要将___________和乳腺蛋白基因的启动子、终止子重组在一起，通过显微注射等方法导入牛的受精卵中。受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

(5)“试管牛”的形成用到的生物技术有____ (填序号)

①早期胚胎培养   ②体外受精   ③胚胎移植   ④核移植

(6)早期胚胎中的胚胎干细胞，不仅可以应用于哺乳动物胚胎性别鉴定，还可应用于治疗人类的某些疾病，如老年痴呆症、糖尿病等； ES细胞体外诱导分化培育出人造组织器官用于_______、研究体外细胞分化等领域。 

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的________发育而来，所采用的技术应为________，培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、________等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的________细胞，ES在形态上表现为________。

（3）由于物种间存在________，因此自然情况下哺乳动物远亲物种问的配子往往无法完成________作用，或者即便能完成也不能发育，但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠一大鼠、人—鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞中通常含有________个染色体组。

    图3

（1）微载体的直径很小，其培养原理是将对细胞无害的颗粒——微载体加入到培养液中，使细胞在其表面____生长，而且操作中需要通过搅动使微载体始终保持悬浮状态，从而让细胞与培养液充分接触，这样细胞就可以在载体表面繁殖成 ______（“单层”、“多层”）细胞。

（2）培养罐中培养细胞时，要注意保持适宜的温度和pH，还需要提供细胞所需的营养、气体环境等，为维持培养液的pH，应在培养液中加入95%空气和___的混合气体。图3是某科研小组培养的细胞，由于培养用具灭菌不严格，结果出现曲线2的情况，为了避免这种情况通常可以在培养液中加入抗生素，其作用是______。

（3）在生产单克隆抗体的过程中，杂交瘤细胞在加入培养罐前，需筛选出符合条件的细胞群，还要对选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和_________方能加入培养罐培养。单克隆抗体作为诊断试剂，具有________________的优点。

（4）科研人员利用明胶微载体培养出了胚胎干细胞，并在培养液中加入______因子，成功构建了骨组织。

（5）在试管动物的培育中，涉及的关键技术是体外受精和___________的培养，再将这些胚胎进行移植，就可以实现良种动物的大量繁殖。移植中要求受体母牛要具有健康的体质和____________的能力。

（1）胚胎干细胞可由囊胚的_______细胞分离培养获得。

（2）利用PCR技术扩增干扰素基因时，需在______________酶的作用下进行。PCR技术主要利用了______________的原理。

（3）将经过修饰的腺病毒与干扰素基因重组形成的______________转移到ES细胞中，筛选出成功转移的细胞进行扩增培养。

（4）有人得到如图所示的含有目的基因的表达载体，但其不能在宿主细胞中表达目的基因产物，分析目的基因不能表达的原因是______________。

（5）由于干扰素很难在体外保存，为解决这一问题，可利用______________对干扰素进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→ 设计预期蛋白质的结构→ 推测应有的__________→ 找到对应的脱氧核苷酸序列。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）由图1可知，步骤②中要分离出ES细胞，需将重组胚胎培养到_______期。将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞，是因为ES细胞在功能上具有______________。

（2）步骤③中，需要利用PCR技术扩增目的基因。利用PCR技术扩增基因的前提是要有________序列，以便根据这一序列合成_______。图2 A,B,C,D四种单链DNA片应选取_______作为引物（DNA复制方向总是从5’向3’延伸）。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为_________。

（3）基因工程的核心是_________，其目的是使目的基因在受体细胞中___________，并且可 以___________，同时使目的基因能够________。检测目的基因是否转录的方法是________。将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发_____色荧光的细胞进行体外诱导。

下图表示利用小鼠胚胎干细胞（ES细胞）做的研究，请分析回答下列问题：

（1）a过程表示基因工程，则其核心步骤是______________________________________。

（2）ES细胞在饲养层细胞上，能够维持__________状态，为检测致癌基因是否已捕入ES细胞的DNA，可采用__________________技术。

（3）c过程的胚胎培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加____________________________以及血清等物质。

（4）d过程移入的胚胎能够存活，是因为受体子宫并不会对其发生____________，同时能够与受体子宫建立正常的________________联系。对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的__________________细胞进行鉴定。

（5）用肝癌细胞作抗原刺激B淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后经筛选、细胞培养，获得抗癌细胞的单克隆抗体。该产物与____________________相结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。

胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题。

（1）应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于________，细胞B的名称是________。

（2）应用2中牛完成体内受精的场所是________，刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为________。这种试管牛的产生，采用的胚胎工程技术有________（至少答出2种）等。

（3）应用3中细胞C、D分别取自________、________。

（4）应用4中通过________技术获得二分胚①和②，同时，可以通过取样________进行分子水平的早期胚胎性别鉴定；也可以在细胞水平上通过________对的分析进行性别鉴定。