科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关的酶切位点。请分析回答下列问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用____________技术对目的基因进行扩增，在该反应体系中需加入________、模板序列、原料及两种________。然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有__________________。

（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是____________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

（3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的__________________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是____________________。

屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的___________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列_________(填“相同”或“不同”）。在提取RNA时需要向提取液中添加RNA酶抑制剂，其目的是___________。

（2）将获得的突变基因导人普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用Sma Ⅰ切割，原因是__________。构建重组质粒时，在其目的基因前需要添加特定的启动子，启动子的作用是________________。

（3）转基因技术是否成功，需要对受体细胞进行分子水平的检测，首先是用____________方法检测受体细胞染色体DNA上是否插入目的基因，其次需要用_____________方法检测目的基因是否转录出了mRNA。最后，还要检测人乳铁蛋白是否成功表达。

(1) 过程①注射的A物质是指________________________

(2) 过程③需要用同种限制酶分别切割目的基因和载体，其目的是________。

(3) 基因工程技术引起的生物变异属于可遗传变异中的________。

(4) 过程③中构建的基因表达载体除了含有目的基因外，在组成上还需要含有            。

(5) 过程④中，受精卵一般作为动物基因工程的受体细胞，除了因为受精卵的具备全能性外，还有什么优点？         。

(1) 苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列,科研人员可通过____法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是____________。 

​ABCD

(3) 将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有____的平板培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。 

(4) 提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入____酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR反应,根据是否有相应产物生成判断毒蛋白基因在白僵菌体内是否完成____。 

(5) 科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的______,以判断重组白僵菌的杀虫效果。 

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

I:回答与微生物有关的问题：

（1）泡菜在发酵过程中，起作用的微生物主要是_____和乳酸菌，其发酵产物中含有有机酸和_____等．

（2）腌制的食物中往往含有少量的亚硝酸盐，对亚硝酸盐的定量测定可以用_____法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与_______偶联成_____色化合物．在实验过程中，测定的是_____值，以反映溶液中亚硝酸的含量．

（5）若存在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是________

（6）在培养大肠杆菌过程中，有关操作正确的是_____．

A．玻璃刮刀和接种环一样，只需灼烧灭菌

B．培养基分装到培养皿后进行灭菌

C．倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行

D．获得的菌种如果需要保存，可置于37℃恒温保存．

II：回答与基因工程有关的问题：如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径．据图结合所学知识回答下列问题：

（1）①过程称为________，该过程中常用的酶有_________________，为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来，所选择的质粒上应该具________．

（2）培育转基因羊的过程中，科研人员通过_______技术将重组质粒M转移到受体细胞A中，受体细胞A应该是_______（填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵）．

（3）莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是___________，导人该细胞后，需对该细胞进行培养，经_________过程形成愈伤组织，再分化成幼苗长成转基因莴苣植株，此过程涉及的细胞工程技术是__________，该技术的原理是 ________________。

（4）过程⑥常用的方法是用________来处理大肠杆菌，使其易于吸纳重组质粒M．

如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答：

(1)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?___________。为什么?_______________。

(2)过程②必需的酶是_____________酶。

(3)在利用A、B获得C的过程中，一般用______________切割A和B，使它们产生___________，再加入________________，才可形成C。

(4)由此可知，基因工程操作一般要经过A的获取、________(填字母)和________(填字母)的结合、_________(填字母)导入D、目的基因在大肠杆菌中表达与检测四个步骤。

回答下列基因工程的有关问题。

（1）步骤①和②中常用的工具酶是               和               。

（2）上图中质粒上有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因两个标记基因，经过①和②步骤后，有些质粒上的                 基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。

（3）步骤④：将锥形瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，能在C中生长的大肠杆菌有                种。

（4）步骤⑤：用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于            （填D或E）上，请在图中相应的位置上圈出来（标在答题纸相应位置）。

如图是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，a～h为操作过程，请据图回答有关问题。

(1)“试管牛”技术的操作流程是________(用箭头和字母表示)。

(2)写出图中数字标号代表的结构名称：①________；②________；③________。

(3)图中用到的激素是________，过程h常用的方法是________。

(4)在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意________________________________________。

(5)受体母牛必须和供体牛属于________。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是                         。