图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列有关现代生物科技的问题：

(1)糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素治疗方法。基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是________________，该酶的作用是__________________，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。

(2)蛋白质工程的基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸的序列→找到相对应的________序列。

(3)单克隆抗体的制备过程中，经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的B淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行________________。

(4)．分析有关基因表达的资料，回答问题。

取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图1。

               图1                                                 图2

a.现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是__________。

b.图2是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是________。

A. HindⅢ           B. EcoRⅠ          C. EcoB          D. PstⅠ

c.新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行________，才能确定受体细胞已含有目的基因。

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下：

材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于－20℃条件下保存24h。

DNA粗提取：

第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。

第二步：先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95％的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。

第三步：取6支试管，分别加入等量的2mol／LNaCl溶液溶解上述絮状物。

DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：

（注：“＋”越多表示蓝色越深）

分析上述实验过程，回答下列问题：

（1）该探究性实验课题名称是______________________________。

（2）第一步中加入的研磨液成分中包括洗涤剂，其作用是____________，还包括NaCl，其作用是____________。

（3）第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少____________。

（4）根据实验结果，得出结论并分析。

①结论1：与20℃相比，相同实验材料在－20℃条件下保存，DNA的提取量较多。

结论2：________________________________________________。

②针对结论1，请提出合理的解释：_________________________。

（5）氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高粗提取时DNA的纯度，依据氯仿的特性，在第三步的基础上继续操作的步骤是：___________________，然后用体积分数为95％的冷酒精溶液使DNA析出。

（6）为了检测提取的DNA，应选用的试剂是__________________。

(1) 若图示为“DNA的粗提取与鉴定”的实验操作:

①图中实验材料A可以是下面的____(填字母)。

a. 花菜     b. 香蕉     c. 猪肝      d. 猪血

②若选用植物组织,研磨前加入的B一般为________,作用分别是_。 

③实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入2 mL下表所示的3种溶液中,经搅拌后过滤,获得相应的3种滤液,含DNA最少的是滤液____。 

(2) 若图示为“检测生物组织中的还原性糖”的实验操作:

在检测滤液C中是否含有还原性糖时,向C中加入的是____色的斐林试剂,欲得到实验结果,还需要进行的步骤是_________。 

(3) 若图示为“叶绿体色素的提取和分离”的实验操作:

①研磨前加入的B应包括____________,为了防止有机溶剂的挥发,操作过程中除了加快研磨速度外,还需________________。 

②将研磨液进行过滤时,需要在漏斗基部放上________。 

（1）步骤①中苹果组织研磨前先经液氮冷冻处理的主要优点是______________________。在常温条件下，也可向切碎的组织材料中加入一定量的食盐和_________，再进行充分搅拌和研磨，加入该物质的作用是______________________________。

（2）根据实验流程可推知，步骤③、④所依据的原理是_________________________。

（3）步骤⑤加入2～3倍体积的95%乙醇的目的是________________________。

（4）下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：

①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol·L^-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解。[来源:学|科|网]

②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60℃水浴中加热5min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝。

请指出上面实验步骤中的两个错误：_____________________________。

（5）兴趣小组成员还以同种苹果的不同组织器官为材料，测定不同组织细胞中DNA的含量，结果如下表（表中数值为每克生物材料干重中DNA含量）：

试从细胞分裂的角度，解释不同生物材料中DNA含量差异明显的原因_________________________。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作：

（1）图中实验过程中，研磨前加入的B应该是______________。

（2）通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是______________，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是______________。

（3）在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中，经搅拌后过滤，获得下表所示的4种滤液，含DNA最少的是滤液________。

（4）析出DNA过程中，加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓的目的是______________。

（1）图中正确的实验操作顺序是                      （用序号与箭头表示）。

（2）步骤③中加入蒸馏水的目的是                             ；步骤⑤中加入蒸馏水的目的是                         。

（3）步骤①中所用酒精最好是经过       后再使用，该步骤的目的是_________________________。

（4）DNA可用               试剂鉴定，沸水浴后的颜色为             。

（5）由于鸡血较难找到，某学生试图用猪血代替，结果没有成功，其原因最可能是                              。

下列是关于生物技术实践方面的实际问题：

（一）鸭梨醋饮属绿色健康饮品，既保存了鸭梨中的多种氨基酸、维生素、矿物质、有机酸等营养成分又兼具果醋醒酒护肝、助消化、降低血脂、软化血管等养生保健功能，深受广大消费者青睐。下图为鸭梨醋饮的制作流程简图，请据图回答问题。

（1）为了提高该微生物的利用率，最好用       法对其进行固定。固定后应在固定溶液中浸泡一段时间，然后       ，转移至鸭梨汁中发酵。

（2）过程②需要控制的条件      （至少列举两点）。过程②所用微生物与过程①所用的微生物结构上最显著的区别是        

（3）若利用新鲜的鸭梨获取DNA，应事先去皮剪成小块，后添加      ，进行搅拌和研磨，再过滤收集滤液。

（二）日常生活中使用的加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。

（4）由下图推知，该实验的目的是      ，50℃时加酶洗衣粉中碱性蛋白酶的最适含量是        。

（5）下表是添加脂肪酶的加酶洗衣粉和普通洗衣粉洗涤效果的实验记录，请据表回答问题：

若实验组1号洗净所需时间接近7 min，最可能的原因是       。

（6）根据以上实验结果，写出两项提高加酶洗衣粉洗涤效果的措施：       。