图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列有关现代生物科技的问题：

(1)糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素治疗方法。基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是________________，该酶的作用是__________________，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。

(2)蛋白质工程的基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸的序列→找到相对应的________序列。

(3)单克隆抗体的制备过程中，经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的B淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行________________。

(4)．分析有关基因表达的资料，回答问题。

取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图1。

               图1                                                 图2

a.现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是__________。

b.图2是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是________。

A. HindⅢ           B. EcoRⅠ          C. EcoB          D. PstⅠ

c.新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行________，才能确定受体细胞已含有目的基因。

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

乳头瘤病毒(HPV)持续感染可导致宫颈癌发生。科研人员将HPV外壳L1蛋白基因与在人体中不能复制但能有效表达外源基因的痘苗病毒重组，制备新型疫苗。

(1)用痘苗病毒感染鸡胚细胞，一段时间后洗去吸附的病毒，将鸡胚细胞转入液体培养基中培养，培养基中加入适量抗生素以避免________。在培养基中加入L1蛋白基因与质粒连接构建重组质粒，使L1蛋白基因与________在鸡胚细胞内发生DNA重组，得到重组病毒疫苗。依据L1蛋白基因序列设计引物扩增重组病毒DNA，以检测_______________________。

(2)为研究重组疫苗的保护作用，将生长发育状况一致的小鼠随机均分为三组，1组注射用PBS缓冲液配制的重组病毒疫苗100 μL,2组注射________作为对照，3组注射________作为空白对照。

(3)给上述三组小鼠皮下注射C3细胞(含有HPV基因的癌细胞)，观察、记录小鼠成瘤情况，结果如下。

据实验结果分析，尽管各组小鼠都可成瘤，但实验组小鼠__________________________，说明重组病毒疫苗具有一定的免疫保护作用。接种重组病毒疫苗的小鼠体内表达________作为抗原，刺激机体产生特异性免疫。皮下注射C3细胞时，HPV引起________细胞迅速增殖、分化，产生大量抗体，从而起到免疫保护作用。根据免疫学知识，注射疫苗后，只有诱发出机体的________免疫，才能有效清除癌细胞。

(4)若欲检验重组病毒疫苗是否有治疗作用，对小鼠进行的处理最恰当的是________(选填下列字母)。

A．先注射HPV病毒，一段时间后注射重组病毒疫苗

B．先注射重组病毒疫苗，一段时间后再注射HPV病毒

C．先注射C3细胞，一段时间后注射重组病毒疫苗

D．先注射重组病毒疫苗，一段时间后再注射C3细胞

科学家从链霉菌提取抗除草剂基因(bar基因)，用来培育抗除草剂作物。回答下列问题：

(2)将种子的胚划伤，简称划胚。请说出农杆菌将bar基因导入划胚细胞的过程：____________________________________________。

(3)某兴趣小组要探究各种划胚方式(包括横划、纵划和穿刺)对bar基因导入大豆种子胚细胞效率的影响。请将有关实验步骤补充完整。

步骤1：_______________________________________________中培养23天。

步骤2：用_____________________技术鉴定萌发植株的细胞是否导入bar基因。

(4)下表是不同植物对除草剂耐受性研究的实验结果。据表分析可知，玉米对除草剂耐受性最大，判断依据是_____________________________。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子，通过体外受精，形成受精卵；

Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；

Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

(1)实验步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行________处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的生理反应包括________________________________________________________________________。

(2)实验步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入奶牛受精卵最为有效的方法是________。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤的目的是__________________________________________________________________________________。

(3)实验步骤Ⅲ中,进行动物早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还要添加_____和动物血清。

(4)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为________的奶牛胚胎进行移植。

某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下：

材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于－20℃条件下保存24h。

DNA粗提取：

第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。

第二步：先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95％的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。

第三步：取6支试管，分别加入等量的2mol／LNaCl溶液溶解上述絮状物。

DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：

（注：“＋”越多表示蓝色越深）

分析上述实验过程，回答下列问题：

（1）该探究性实验课题名称是______________________________。

（2）第一步中加入的研磨液成分中包括洗涤剂，其作用是____________，还包括NaCl，其作用是____________。

（3）第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少____________。

（4）根据实验结果，得出结论并分析。

①结论1：与20℃相比，相同实验材料在－20℃条件下保存，DNA的提取量较多。

结论2：________________________________________________。

②针对结论1，请提出合理的解释：_________________________。

（5）氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高粗提取时DNA的纯度，依据氯仿的特性，在第三步的基础上继续操作的步骤是：___________________，然后用体积分数为95％的冷酒精溶液使DNA析出。

（6）为了检测提取的DNA，应选用的试剂是__________________。

科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答：

(1)利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、________、电激等诱导因素诱导动物细胞融合。经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行________和________，经多次筛选以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：

①取________细胞的细胞核，移植到去核的________细胞中，构成重组细胞。

②将重组细胞在________条件下做大规模培养或注射到小鼠________内增殖，以获得大量单克隆抗体。

(3)也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。

①酶A是指________，酶B是指__________________________。

②图中Ⅰ表示________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是______________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是_______________。

(1) 若图示为“DNA的粗提取与鉴定”的实验操作:

①图中实验材料A可以是下面的____(填字母)。

a. 花菜     b. 香蕉     c. 猪肝      d. 猪血

②若选用植物组织,研磨前加入的B一般为________,作用分别是_。 

③实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入2 mL下表所示的3种溶液中,经搅拌后过滤,获得相应的3种滤液,含DNA最少的是滤液____。 

(2) 若图示为“检测生物组织中的还原性糖”的实验操作:

在检测滤液C中是否含有还原性糖时,向C中加入的是____色的斐林试剂,欲得到实验结果,还需要进行的步骤是_________。 

(3) 若图示为“叶绿体色素的提取和分离”的实验操作:

①研磨前加入的B应包括____________,为了防止有机溶剂的挥发,操作过程中除了加快研磨速度外,还需________________。 

②将研磨液进行过滤时,需要在漏斗基部放上________。 

（1）步骤①中苹果组织研磨前先经液氮冷冻处理的主要优点是______________________。在常温条件下，也可向切碎的组织材料中加入一定量的食盐和_________，再进行充分搅拌和研磨，加入该物质的作用是______________________________。

（2）根据实验流程可推知，步骤③、④所依据的原理是_________________________。

（3）步骤⑤加入2～3倍体积的95%乙醇的目的是________________________。

（4）下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：

①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol·L^-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解。[来源:学|科|网]

②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60℃水浴中加热5min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝。

请指出上面实验步骤中的两个错误：_____________________________。

（5）兴趣小组成员还以同种苹果的不同组织器官为材料，测定不同组织细胞中DNA的含量，结果如下表（表中数值为每克生物材料干重中DNA含量）：

试从细胞分裂的角度，解释不同生物材料中DNA含量差异明显的原因_________________________。