土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤：

步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如下表）。

分析回答：

（1）从物理形态看，培养基A属于_____培养基。培养基中磷源应该是____。

（2）步骤1中接种方法是_____，步骤2中接种环的灭菌方法是_____。

（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____。

（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min^-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到下图所示曲线。

①用摇床进行培养的好处是________________________________________________。

②结果表明最优良的解磷菌株是____________。

科研人员发现，工业污水中有一种极难降解的含氮有机物NS（无色的NS与碘作用可形成蓝色反应），但可被NS分解菌高效降解。请分析回答下列问题：

（1）在筛选NS分解菌的过程中，以NS为唯一氮源的培养基按用途属于_________培养基，NS可为NS分解菌提供生长所需的______________等营养物质。若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用______________法接种。

（2）NS分解菌培养过程中，获得纯净培养物的关键是___________________；为排除杂菌污染，应设置的对照实验是___________________。 

（3）欲鉴定筛选得到的NS分解菌是否具有实用价值，在培养NS分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外，还需要加入______用于颜色反应鉴定NS分解菌。若用上述培养

基比较不同菌株降解NS能力的大小，可用相同NS浓度的上述培养基培养不同菌株，一定时间后，通过测定____________________来确定不同菌株降解NS能力的大小。

从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。如培养噬盐菌的菌样应从___________环境中采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择___________的培养基,并在___________条件下培养。 

(3)接种前要对培养基进行相应的灭菌处理。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在_____________条件下进行。 

(4)如图是微生物纯化培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。获得图A效果与图B效果的接种方法分别是_______。某同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是___________。应当怎样操作才可避免此种现象?__________________。 

(5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响,自变量是_______,应该保持____________等不变(至少答两项)。 

回答下列有关微生物培养的相关问题：

Ⅰ．已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可以用于生物柴油的生产。回答下列问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用____________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可用____________（填"萃取法"或"水蒸气蒸馏法"）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以_______为碳源的______（物理状态）培养基进行培养。培养的结果发现没有得到微生物B的菌落或者数量极少，可在此操作之前增加____________这一操作步骤。

（3）若要测定微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数，若要测定活菌数量，可选用____________法进行计数。

Ⅱ．某医院有一个罕见的细菌感染患者，医生想通过抑菌实验，从常用的抗生素一青霉素（A），氨苄青霉素（B），庆大霉素（C），氯霉素（D），环丙沙星（E）中寻找对病人最有效的一种．部分实验步骤如下：

第一步：按下方所列配方配置培养基：

第二步：取单菌落适当稀释，用3支无菌滴管吸取从此病人体内分离到的细菌悬浮液2滴，滴于3个平板培养基表面，然后分别用3个无菌涂布棒涂匀，37℃恒温箱中培养，使细菌长满平板表面。

（4）上述培养基配方中作为蛋白胨为微生物的生长提供了____________________。

（5）如图圆环表示一个培养皿平面，用浸有不同抗生素的圆纸片间隔放到培养基土，如下图所示。

培养2d后，A滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对青霉素____________；B滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对氨苄青霉素____________；C滤纸片周围的透明圈比A滤纸片周围的透明圈小，说明____________；D滤纸片周围的透明圈比A滤纸片的也小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是氯霉素的____________。

（6）经测量透明圈大小，得到如下结果（单位mm）：

那么，你建议医生使用哪一种抗生素？____________．

回答下列与酵母菌有关的问题：

（1）培养酵母菌的培养基应采用________法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是_______________。

（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进_______（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养,可促进______（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。

（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是___________。

（4）为筛选和纯化酵母菌，根据用途应选用 ____________培养基，常用的接种方法____________和____________．扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计了三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为__________个/mL．该统计结果_____________（低于、高于）实际值。

（4）通常采用______法来测定亚硝酸盐的含量，其原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与______发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成______色染料。

A．大肠杆菌    B．产甲烷细菌    C．金黄色葡萄球菌      D．极端嗜盐菌

请回答下列有关“微生物的实验室培养”的问题：

（1）微生物的接种技术操作方法各有不同，其核心都是__________________________________。

（2）平板划线法是通过接种环在固体琼脂培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种___________分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。

（3）平板划线时，每次划线前都需要灼烧杀死上次划线残留的菌种，其目的是_________________________________________________________。

（4）对水样中的大肠杆菌进行计数时，采用的技术方法为___________________，利用的培养基为___________________。

（5）对于需要长期保存的菌种，可以采用________________法。

由南京农业大学的李顺鹏教授领导的团队经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术，其原理是通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物，解决了物理、化学处理修复难度大，成本高及二次污染的问题，其中有机磷降解菌专一降解甲基对硫磷(一种含氮有机农药)，并依赖降解产物生存，且降解效果达100%。下图是研究人员筛选有机磷降解菌的主要步骤，请分析回答问题：

（1）培养过程中需振荡培养，由此推测该“目的菌”的细胞进行的细胞呼吸方式为            ，振荡培养的目的是                   。在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以          为唯一氮源的固体培养基上。

（2）对培养基选用的灭菌方法一般是                。

（3）如果该种细菌在蛋白质合成过程中，携带天冬氨酸RNA为CUG，则转录成该天冬氨酸密码子所对应的DNA分子中模板链的碱基组成为          。

（4）研究人员在筛选有机磷降解菌时，发酵液不慎发生污染，菌群几乎全部死亡，但却侥幸从中获得了少数可抵抗污染的新菌种，细菌这种新性状的产生来自于          。

（5）为了得到单个菌落，比较简便的接种方法是          ，但该方法不宜对菌落计数，这种方法的在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是                                              。

自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中的铵盐，对水体有一定的净化作用，请回答：

(1)培养硝化细菌时，将含固体培养基的培养皿倒置的目的是____。培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供____，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于____培养基。

(2)硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的____。样液稀释10³倍后，取0.1 mL涂布到四个平板，统计其菌落数分别为251、265、276、348个，可推测原样液中硝化细菌的浓度为____个/mL，该方法测定的硝化细菌的含量和实际值相比，一般____(填“偏大”或“偏小”)。

(3)若要探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小，现提供足量含某铵盐的液体培养基及pH值分别为5、9的弱酸和弱碱缓冲液，写出你的实验设计思路。(注：物质的具体检查方法不做要求。)                                        。