某生物兴趣小组通过测定土壤中的微生物的种类、含量等来了解其土质情况，并做了相关微生物的分离工作。回答相关问题。

⑴获得纯净培养物的关键是___________________________，这是研究和应用微生物的前提。

⑵从土壤中分离纤维素分解菌时，常从公园里、街道旁、花盆中的土壤或是农田、菜园土选取土壤时，原因是___________________________。

⑶该小组对某种菌进行扩大培养时等分为两组，A组静置培养，B组振荡培养。结果发现B组比A组的细菌要多得多，原因是_______________________________（答两点）。

⑷小组进一步发现，该土壤中只有一种真菌，欲使其从土壤中与其它细菌分离开，可在牛肉膏-蛋白胨培养液中加入___________。分离纯化后提取DNA测序发现含有产脲酶的基

因序列，请设计实验证明该种真菌可合成脲酶（简要说明实验步骤，结果，结论。相关试剂、仪器、菌种等都可提供）____________________

苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。某同学准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选苯酚降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）苯酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有___________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_______，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步__________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_________。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为______。

如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_____（填序号：①5　②10　③20）倍后，再进行比色。

如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：

(1)依物理性质，该培养基属于__________培养基。依用途划分，则属于_________培养基。

(2)根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是______________，培养的微生物可能是_______________。

(3)该培养基中的碳源是_____________。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行灭菌。

(4)若用该培养基培养尿素分解菌,应除去的物质是________________,加入的物质是_____________。

(5)为检测尿素分解菌的存在与否,还应加入________________,将呈___________反应。

在白酒发酵的窖池中，当培养液的pH≤4.5时，酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制，甚至停止。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的环境下继续表现出较强发酵能力，适宜作白酒发酵生产用菌种，为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌，研究者进行了相关实验，请回答下列有关问题：

（1）在发酵过程中，窖池中培养液的pH会逐渐下降，原因是_________________________。

（2）取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再取1mL 上清液接入一定量的麦芽汁培养基中培养，其目的是_____________________，2天后分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上，培养结果见下表。为选择合适的菌种，根据培养结果，可从表格中pH范围为_________的培养基中获得菌种。注：“+”越多表示菌体长得越好

（3）通过图示_____________法进行纯化培养，取最终的酵母菌稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，在恒温培养箱中培养一段时间后计数。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是_____________。

（4）实验获得了三个耐酸性较强的酵母菌菌株，特点如下表。

依据菌株特点，研究者认为________菌株更适合作为白酒发酵菌株，作出这一判断的理由是____________________________________________________。

请回答下列有关微生物的一些问题。

（1）微生物的消毒和灭菌：在微生物培养中，对培养基常用_________法进行灭菌；静止空气中的细菌可用___________杀灭，原因是紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。如果要检测培养基灭菌是否彻底，可以采用的方法是_______________________观察培养基上是否有菌落产生。

（2）微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学反应式：____________________。在果醋制作时，运用醋酸菌在_____和糖源充足时，将葡萄糖分解成醋酸。

（3）微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的_________（填“选择”或“鉴别”）培养基中加入________指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变___色。

（4）微生物的接种：微生物的接种方法很多，最常见的是____和_______。

回答下列有关发酵及微生物的培养等问题：

 (1)制作果酒时，葡萄糖为发酵菌种提供____。进行果醋发酵时需提供充足的___；参与果醋发酵的菌种是___；培养时温度控制在____。

(2)某中学生物兴趣小组在进行A细菌的培养过程中，发现了另一种B细菌，在B细菌周围A细菌的生长繁殖受到抑制，这是由于B细菌产生了不利于（抑制）A细菌生存的物质。

①请你在以下实验的基础上，继续完成验证A细菌生长繁殖受到抑制原因的实验过程______________________________。

②培养微生物时，所用培养基需采用___进行灭菌；接种微生物常用的方法中可用于微生物计数的是___。

A. 稀释涂布平板法     B.平板划线法

  Ⅰ．某同学以新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。请回答：

    （1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的目的是保证在            培养基上获得__________。

    （2）制作的培养基必须使用__________（填仪器名称）灭菌后才能使用。如果在配制培养基的过程中加入碳酸钙，制出的培养基就显得不透明，用这种培养基来分离纯化乳酸菌，碳酸钙起到的作用有____________和____________。肉眼能明显观察到菌落时应挑选出__________的菌落作为候选菌。

    （3）获得的乳酸菌菌种若要采取临时保藏，首先要将菌种接种到试管的____________上，并在适宜的温度下培养，当菌落长成后才放入40度的冰箱保存。

    Ⅱ．回答下列与芳香油提取相关的内容。

    （1）实验室提取胡萝卜素常用____________法，而提取植物芳香油常用____________法。

    （2）如果蒸馏过程中不进行冷却，则芳香油提取量会____________。

    （3）在对玫瑰精油粗提取的过程中，玫瑰花瓣与清水的质量比为__________，向乳浊液中加入质量浓度为0.1g/mL的NaCI溶液的目的是__________用分液漏斗分离得到油层后，为了进一步去除水分，可以加入__________。

胡萝卜素可分别从蔬菜胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，其流程图如下图所示。请根据提取过程及胡萝卜素的性质，回答下列问题：

（1）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供____________。

（2）实验室筛选产胡萝卜素的酵母菌菌种R时，可选用____________法接种。工业上利用酵母菌R发酵生产提取胡萝卜素，酵母菌用____________（从培养基物理性质考虑）来培养。

（3）新鲜的胡萝卜含有大量的水分，从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程要注意控制温度和时间，这是因为__________________会导致胡萝卜素分解。

（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素，鉴定过程中需用胡萝卜素____________作为对照。

（5）萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有____________，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。现有石油醚和乙醇两种有机溶剂，应选用其中的____________作为胡萝卜素的萃取剂，选用它的原因是______________________________。

［生物—选修1：生物技术实践］某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：

（1）培养基中加入化合物A的目的是________，这种培养基属于________培养基。

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________。实验需要振荡几次进行培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。

（3）转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，在进行下一区域划线前要将接种环________。

（4）研究人员统计污水池中“目的菌”的总数，选用10^－4、10^－5、10^－6稀释液进行涂布平板，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是________，此对照实验的目的是________。

（5）研究人员采用平板划线法纯化水样中分离出的细菌。操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的平行线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条平行线上无菌落，其他平行线上有菌落。造成第一条平行线无菌落可能的操作失误有________。

（6）在下列示意图A和图B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

微生物的分离、培养和计数是现代生物工程应用中的重要环节。图示为大肠杆菌分离和培养过程中部分操作示意图。请分析回答下列问题。

（1）实验过程中对培养皿和实验操作者的双手所采用的灭菌或消毒方法依次是________、________。

（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________。

（3）图示是利用    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是    。

（4）关于图示的操作方法和结果正确的是    

A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌  B．划线操作须在火焰上进行

C．在5区域中才可以得到所需菌落    D．在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌

（5）若要培养具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养基的基础上需要    。