有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制是实验过程如图甲、乙所示。

（1）微生物生长繁殖所需要的主要营养物质有碳源、水、_____四类，该实验所用的选择培养只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_________。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是______。划线的某个平板培养后，第一划线区域上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有                  （填二项）。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示的实验。该实验的假设是_________，该实验设计是否合理？为什么？

选修1：生物技术实践]

 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。                           

回答下列问题：

（1） 为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2） 取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3） 为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______（填“敏感”或“不敏感”）；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____（填“敏感”或“不敏感”）；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。

(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。

下图表示微生物的接种实验中的一些步骤。请回答下列有关问题。

①把接种工具燃烧至变红②将接种工具在火焰旁边冷却③接种

（1）图中接种工具的名称是____________，制备培养微生物的培养时，灭菌与调pH的先后顺序是________。

（2）步骤②中，将接种工具冷却的原因是____________。

（3）步骤③中，将接种工具灼烧____________次

（4）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。

①小明纯化菌种的接种方法为________，该方法不仅可以进行纯化，还可以进行____________

②采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1~5号比色管的苯酚浓度应分别为____________。

如果废水为100mg/L苯酚溶液，降解后约有25%的苯酚残留，则需将残留液稀释____________（填序号：①10②20③30）倍后，再进行比色。

回答下列微生物及其培养问题

　　农业上广泛使用的除草剂在土壤中不易被分解，长期使用会污染土壤。为了修复被污染的土壤，可按下图程序选育出能降解该除草剂的细菌。（注：已知该除草剂是一种含氮有机物；含一定量该除草剂的培养基不透明。）

（1）微生物培养过程中需要的营养物质主要有_________________。由于不同种类微生物的菌落特征表现不同，因此可以利用__________（填“固体”或“液体”）培养基来培养，通过观察菌落特征对微生物进行初步的鉴定和分类。

（2）培养基的配制主要包括如下步骤：①溶化，②调pH，③高温高压灭菌，④称量。这些步骤正确的顺序是__________。（填编号）

（3）实验中进行平板划线操作（如图乙、丙所示）的目的是__________。在具体操作时，首先要将接种环通过（填编号）__________（①紫外线；②酒精灯灼烧；③高压蒸汽）灭菌；第二次及以后的划线，总是从__________开始。

（4）为了选育出能降解除草剂的细菌，在配制培养基时需添加一定量的该除草剂，其原因是____________________。

（5）为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿__________培养。在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为__________。

（6）如果筛选能降解该除草剂的细菌结果如图丁所示（A~E分别表示不同的菌株），其中的B、D菌株周围无透明圈形成，说明____________________；如果从A~E菌株中选育高效的能降解该型除草剂的细菌，应选育菌株__________。

（7）为探究此除草剂的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图戊所示实验。该实验的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；该实验设计缺少对照处理，正确的对照处理是__________________。

纤维素分子不能进入酵母细胞．为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图．

A．①②

B．①③

C．②④

D．③④

（3）纤维素酶基因的表达包括__________和___________过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有__________

（4）在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株__________不能存活，原因是____________________________．

（5）酵母菌生产酒精的细胞部位是_______________,产生酒精时细胞的呼吸方式是________________．在利用纤维素生产酒精时,菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的中重组质粒含有_________，使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率．

植物组织培养技术被广泛应用于培育无病毒植株、育种及获得植物次生代谢产物等生产生活实际。如图为番茄植株的培育过程。分析回答下列问题：

(1)①过程中使用了____________酶，获得植物细胞原生质体，此处使用的溶液浓度不宜过小，以防止细胞原生质体________。

(2)铺平板类似于微生物接种，该过程必须在________旁进行操作。平板中添加蔗糖的目的除了提供营养外，还有________的作用。

(3)同一番茄植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因________(填"相同""不相同"或"不一定相同")；图中属于再分化的过程是________(填序号)。

(4)多倍体番茄植株所结果实中维生素含量更高，若想培育多倍体番茄，可选择在图中的过程③中添加____________进行处理，也可以选择在过程⑥中添加__________进行处理。

回答下列有关微生物培养的问题。

某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。

（1）培养基中加入化合物A的目的是________，这种培养基属于________培养基。

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________，同时，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。

（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。

（4）转为固体培养基培养时，常采用        的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）在培养基的配制过程中，操作方法包括以下步骤，其正确顺序为________。

①溶解 ②调pH值 ③定容 ④包扎 ⑤培养基的分装 ⑥称量 ⑦灭菌

A.①②⑥⑤⑦③④                 B.⑥①③②⑤④⑦

C.⑥①②⑤④⑦③                D.①②⑤④⑥⑦③

（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行      处理后，才能倒掉，这样处理的目的是________。

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题：

⑴培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和_______。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是___________和____________。

⑵对培养基进行灭菌，应该采用的方法是___________。

⑶为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于____________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_________作为对照进行实验。

⑷培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越__________。

⑸细菌培养常用的接种方法有_________________和_____________________。

临床实验表明，服用乳酸菌及其制品具有减少人体血清胆固醇含量、降低心脑血管发病率的功效。下面是从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌的实验，请回答下列问题：

（1)制备固体培养基(MRS)：在普通的液体培养基中添加碳酸钙和         ，加热使其熔化，然后转移到锥形瓶中。经高压蒸汽灭菌法处理后，待其冷却至            ℃左右，在                    附近倒平板。

(2)将少量酸奶制成1:10稀释液，再将梯度稀释到10^－6的稀释液涂布于添加了碳酸钙的乳酸菌培养基(MRS培养基)平板上，在             (填“有氧”或“无氧”)条件下 37 ℃恒温培养72 h。挑取               (填“有”或“无”)溶钙圈(或透明圈)的菌落，用       法接种在MRS培养基上反复纯化至纯种备用。

(3)在普通的MRS液体培养基中添加适量                  并用超声波振荡乳化20 min，调PH至7.0，然后将纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后用特定显色剂分光光度法离心测定上清液中            的含量，以                 作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。

(2)在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________________________。

II．有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。 
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(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_________________________。

(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________，这些植物激素一般需要事先单独配制成________保存备用。

(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________。

(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是________________________，该实验设计是否合理？为什么？______________________。