完成下列相关填空

（一）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。

（1）土壤悬液先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出             。

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行            ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到单菌落，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与           强弱相关。

（3）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中         的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高                的利用率。

（4）利用物理或化学方法将植酸酶固定在          的介质上称为固定化酶。实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作，其中第一次洗涤的目的是除去             。

（二）下图为绵羊多莉克隆过程，请回答有关问题。

（5）步骤1中若要获得较多数量的卵细胞，通常对母羊注射相关激素使其超数排卵。步骤2可通过降低           浓度，实现对乳腺细胞的营养限制性培养，可以得到大量的          期细胞，从而实现细胞分裂同步化。

（6）步骤3中科研人员采用         技术进行细胞融合，步骤4通过胚胎体外培养获得胚胎，待发育至              胚胎时进行移植，通常移植至代孕母羊的          部位。

（7）若要将目的基因导入乳腺细胞中，在扩增目的基因时，除利用PCR技术外，还可将目的基因所在的重组载体导入大肠杆菌中，利用大肠杆菌  ▲ 使其扩增。

（8）为获得大量的上述克隆羊，可用胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为胚胎成纤维细胞可进行           培养，理论上可获得无限只克隆羊。

关于传统发酵技术在生产生活中的广泛的应用，请回答下列问题：

（1）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。酵母菌的呼吸代谢途径如下图所示。

①图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的_______中进行，其产物乙醇与________反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的_________中进行。与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度________。

②第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在_________条件下才能完成。

（2）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：
①该实验的自变量是_________________、____________________。
②若发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌的代谢类型是_____。
③如果在实验后，发现32 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是___________。

④从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为___________，脂肪转变为_____________。

（3）回答下列有关泡菜制作的问题：

①制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其主要目的是____________。

②泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有食盐用量、________和________等。

③从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是______________。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．

​（6）基因工程的四个操作步骤是___________、____________、____________、和____________。

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）为避免Bt毒蛋白基因通过花粉传播进入其它植物，一般将Bt毒蛋白基因转入棉花细狍的__________（选择填入“细胞核”或“叶绿体”）。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行_______，使其具有更广杀虫范围，属于___________（生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和___________三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设：

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、__________、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的______________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了___________________原理。

（3）下面的结构示意图中，能体现系统学和工程学原理的是(　　)

绿色植物甲含有物质W，该物质为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，且受热、受潮易分解。其提取流程为：植物甲→粉碎→加溶剂→振荡→收集提取液→活性炭处理→过滤去除活性炭→蒸馏（含回收溶剂）→重结晶→成品。回答下列问题：

（1）在提取物质W时，最好先将原料植物甲晾干，不宜选用新鲜植物甲的原因是___________________________________。也不宜选用高温烘干植物甲的原因是___________________________________。

（2）提取物质W时，振荡的作用是_________________，以提高提取效率。

（3）活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中，用活性炭处理提取液的目的是________________。

（4）现有丙酮（沸点56 ℃）、乙醇（沸点约78 ℃）两种溶剂，在提取物质W时，应选用________作为提取剂，理由是__________________。

（5）提取的物质W应尽量保存在_______________环境中。

生物组织中存在着多种有机物，不同有机物的提取与鉴定方法不尽相同。请回答下列有关问题：

（1）薄荷精油清爽凉快，清咽润喉，是很多中成药中的添加成分，它易挥发，不溶于水，化学性质较稳定。现要求不含有任何添加剂和化学原料，应采取____________法提取薄荷精油。收集到的产物是____________，需要加入____________使其分层，用分液漏斗分离的油层中还需要加入____________以进一步除去水分。

（2）橘子果实含有芳香油，通常可用____________作为材料提取芳香油，提取的方法为___________，不采取水蒸气蒸馏法的原因是___________。在材料选择时，选择新鲜橘皮的原因是____________。为了提高出油率，往往采用__________处理橘皮。

（3）用萃取法提取胡萝卜素，萃取的效率取决于____________，同时还受原料颗粒的大小、含水量等条件影响；提取的胡萝卜素可以通过一法进行鉴定；萃取过程采用水浴加热，不用明火加热的原因是_____________________。

(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素      ,①过程必须用到      酶,②过程使用的是             酶。④表示基因工程中         过程;若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法,则方法C是           。 

(2)图中采用的生物工程技术A和B分别是指                 和        。 

(3)为实现人血清白蛋白基因在转基因牛E的乳腺细胞中表达，应让该血清白蛋白基因和 的启动子等调控组件结合在一起。如果转基因牛E的牛奶中含有               ,则说明人血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。 

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶               分别对                 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为               种、               种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有               作为标记基因。

（3）研究人员通常采用               法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用               技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的               过程。

请回答下列与基因工程、胚胎工程、生态工程有关的生物学问题：

（1）基因工程技术中获得目的基因后，利用PCR技术将该基因扩增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成 。将目的基因导入微生物细胞采用的方法是 。

（2）体外受精是胚胎工程的重要环节，受精前的准备阶段：取自附睾的精子要进行精子获能；来自母方的卵母细胞要在输卵管内进一步成熟，达到 ，才具备与精子受精的能力。胚胎工程最后一道工序是 （填生物技术名称）。

（3）与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体具有很多优点。在癌症治疗时，把抗癌细胞的单克隆抗体与放射性同位素相结合，制成“生物导弹”，借助单克隆抗体的__________作用，将药物带到癌细胞位置，将其在原位杀死。单克隆抗体的制备过程主要应用了_______________技术

（4）桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程________________的原理。