苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________，该培养基属于_______培养基。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐______，以达到富集酚降解菌的目的。

（3）小明同学采用_________________法进一步分离纯化目的菌，该方法先需要用________________对菌液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由

是_______________。制备该步骤中用的培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

（4）下图为______________法示意图，在图中_________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

如图表示利用纤维素生产乙醇的工业流程，回答下列问题：

(1)②中的酶是含有3种组分的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将____________分解成葡萄糖。

(2)若图中①所需的微生物来自土壤，分离该微生物宜从富含纤维素的土壤中取样，采用____________法接种到含有________染液的培养基上培养，挑取培养基上________的菌落进一步扩大培养。

(3)若将100 mL该微生物培养液稀释10⁶倍，取1 mL稀释液接种到选择培养基上，形成了270个菌落，则原菌液中每毫升有该微生物________个，该方法所得测量值比实际值偏低，原因是________________________________________________________。

(4)④接种的微生物是____________

乳酸菌是一种厌氧型细菌，实验室常利用溶钙圈法对乳酸菌进行筛选，其原理是乳酸菌产生的酸性物质和CaCO₃反应而出现溶解圈，以下为乳酸菌筛选的步骤：

①制备乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）（成分：蛋白胨、牛肉膏、无机盐、葡萄糖和水）

②调节pH，并将MRS培养基和CaCO₃溶液灭菌后混合，倒平板制备培养基。

③梯度稀释样品，选择合适的稀释倍数接种。

④挑选产生溶钙圈的菌落。

请回答下列问题：

（1）乳酸菌常用于制作泡菜，用于制作泡菜的泡菜坛要在坛盖边沿的水槽中注满水，其目的是___________，制作过程中亚硝酸盐含量的变化是______。

（2）MRS培养基中蛋白胨可以作为乳酸菌的____________，CaCO₃一方面可以用于鉴别乳酸菌，另一方面还可以________。对培养基一般采用________________法灭菌。

（3）乳酸菌筛选过程中所用的接种方法是_________。若要进一步纯化乳酸菌，可以采取的措施是________________。

工业生产中，提取天然β—胡萝卜素的方法之一：利用红酵母等微生物进行发酵，经过菌体裂解、离心后进行萃取。回答以下有关问题：

(1)若要初步确定某一菌株是否为红酵母菌株，相对简便的操作是通过_________法将菌种接种于固体培养基上，并在适宜的条件下培养一段时间，观察其形成的菌落的_____________(填2个)特征。

(2)碳源的种类对β胡萝卜素的产量有着一定的影响，有关研究结果如下：

据表分析，最佳碳源是_________。若要进一步探究最佳氮源，请简要写出实验设计思路：____________________________________________________。

(3)有科研人员尝试利用紫外线处理红酵母，以获得高产菌株。对处理所得菌株分别进行培养并经裂解、离心后，根据β—胡萝卜素_____________________的特点，可以采用有机溶剂萃取法萃取产物，并对萃取产物通过_______________法进行鉴定，鉴定过程需要用_____________样品进行对比。经定量分析后，若得到高产菌株，要对其进行长期保存，可采用__________的方法在—20℃的冷冻箱中保存。

苹果干腐病是一种名为茶藤子葡萄座腔菌的真菌引起的疾病，病菌通常由枝条伤口入侵感染，在伤口处形成溃疡。某中学的科研小组计划分离出该真菌，并进行药物防治实验，为苹果干腐病的防治提供合理的建议。经过查阅资料，确定了分离时所用的PDA培养基配方，如下表所示：

    该真菌在上述PDA培养基上生长时有特定的形态特征：辐射状白色匍匐菌丝，绒毛状。

    (1)要获得菌落，则上表中还应添加的成分是________。氯霉素的作用是______________。培养基的制备步骤包括计算、称量、溶化、________、倒平板。等平板冷却凝固后，将平板______________，以防止冷凝水污染培养基。

    (2)用剪刀从染病枝条溃疡处剪取1×1 cm²的患病组织，并用0.1％的升汞进行消毒，置于培养基中心，在合适条件下进行培养，共培养五组。待菌落形态特征稳定后，用______________法将该致病菌分别转移至含有等量0.5％苦水碱剂、40％福美砷、清水的上述PDA培养基中进行抗药性实验，并每隔24 h记录一次最后划线区域的菌落数目。

    ①选取______________的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致的菌落数目遗漏。

    ②记录结果如下：

    从结果分析可知，_______________能很好地抑制该真菌的生长，适合用于防治苹果干腐病。

土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤：

步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如下表）。

分析回答：

（1）从物理形态看，培养基A属于_____培养基。培养基中磷源应该是____。

（2）步骤1中接种方法是_____，步骤2中接种环的灭菌方法是_____。

（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____。

（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min^-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到下图所示曲线。

①用摇床进行培养的好处是________________________________________________。

②结果表明最优良的解磷菌株是____________。

科研人员发现，工业污水中有一种极难降解的含氮有机物NS（无色的NS与碘作用可形成蓝色反应），但可被NS分解菌高效降解。请分析回答下列问题：

（1）在筛选NS分解菌的过程中，以NS为唯一氮源的培养基按用途属于_________培养基，NS可为NS分解菌提供生长所需的______________等营养物质。若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用______________法接种。

（2）NS分解菌培养过程中，获得纯净培养物的关键是___________________；为排除杂菌污染，应设置的对照实验是___________________。 

（3）欲鉴定筛选得到的NS分解菌是否具有实用价值，在培养NS分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外，还需要加入______用于颜色反应鉴定NS分解菌。若用上述培养

基比较不同菌株降解NS能力的大小，可用相同NS浓度的上述培养基培养不同菌株，一定时间后，通过测定____________________来确定不同菌株降解NS能力的大小。

从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。如培养噬盐菌的菌样应从___________环境中采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择___________的培养基,并在___________条件下培养。 

(3)接种前要对培养基进行相应的灭菌处理。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在_____________条件下进行。 

(4)如图是微生物纯化培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。获得图A效果与图B效果的接种方法分别是_______。某同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是___________。应当怎样操作才可避免此种现象?__________________。 

(5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响,自变量是_______,应该保持____________等不变(至少答两项)。 

回答下列有关微生物培养的相关问题：

Ⅰ．已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可以用于生物柴油的生产。回答下列问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用____________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可用____________（填"萃取法"或"水蒸气蒸馏法"）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以_______为碳源的______（物理状态）培养基进行培养。培养的结果发现没有得到微生物B的菌落或者数量极少，可在此操作之前增加____________这一操作步骤。

（3）若要测定微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数，若要测定活菌数量，可选用____________法进行计数。

Ⅱ．某医院有一个罕见的细菌感染患者，医生想通过抑菌实验，从常用的抗生素一青霉素（A），氨苄青霉素（B），庆大霉素（C），氯霉素（D），环丙沙星（E）中寻找对病人最有效的一种．部分实验步骤如下：

第一步：按下方所列配方配置培养基：

第二步：取单菌落适当稀释，用3支无菌滴管吸取从此病人体内分离到的细菌悬浮液2滴，滴于3个平板培养基表面，然后分别用3个无菌涂布棒涂匀，37℃恒温箱中培养，使细菌长满平板表面。

（4）上述培养基配方中作为蛋白胨为微生物的生长提供了____________________。

（5）如图圆环表示一个培养皿平面，用浸有不同抗生素的圆纸片间隔放到培养基土，如下图所示。

培养2d后，A滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对青霉素____________；B滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对氨苄青霉素____________；C滤纸片周围的透明圈比A滤纸片周围的透明圈小，说明____________；D滤纸片周围的透明圈比A滤纸片的也小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是氯霉素的____________。

（6）经测量透明圈大小，得到如下结果（单位mm）：

那么，你建议医生使用哪一种抗生素？____________．

回答下列与酵母菌有关的问题：

（1）培养酵母菌的培养基应采用________法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是_______________。

（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进_______（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养,可促进______（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。

（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是___________。

（4）为筛选和纯化酵母菌，根据用途应选用 ____________培养基，常用的接种方法____________和____________．扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计了三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为__________个/mL．该统计结果_____________（低于、高于）实际值。