4．
pET表达系统是原核蛋白表达引用最多的系统,其自身基础表达水平很低,并能实现目的基因的高效表达。pET载体上的目的基因被转移到大肠杆菌后,大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合,需通过T7RNA聚合酶间接调控。另外IPTG(乳糖类似物)可实现图1功能外,还可以使lac抑制子失活,激活lac启动子。请结合图示分析回答下列问题:
图1 
图2
图3
(1) 大肠杆菌时刻感知培养基的营养信息并传递到细胞内启动相应的应答机制,据图1分析,不含乳糖的条件下结构基因Z将____。
(2) Z基因广泛用于基因表达调控的研究,当目的基因插入Z基因,用蓝白斑来筛选工程菌非常方便。X-gal(某种指示剂,无色)是β-半乳糖苷酶的底物,水解后呈蓝色,据此原理,应从图2的____菌落中挑选工程菌。
(3) pET表达载体在构建时用限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ同时切割,与单用限制酶EcoRⅠ相比,采用EcoRⅠ和SmaⅠ双酶切的优点能减少质粒自身环化的概率,并__________。
(4) 根据图3信息,大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合,说明酶具有____。从图中可看出,____基因能够抑制自身基因的基础表达水平,而____可将更多的细胞资源用于目的基因表达,因此可以____以控制靶基因的过度表达。