6.
科学家发现,细菌DNA序列中储存了很多来自不同噬菌体的小片段DNA(被称为CRISPR),功能如图1。哺乳动物细胞内不具有该基因片段和相关功能。真核细胞内的DNA出现断裂后,细胞具有结合同源DNA并以其为模板修复断裂DNA的功能,过程如图2。请回答:
图1 CRISPR功能示意图
图2 真核细胞修复断裂DNA的过程示意图
(1) 据图1可知,同种噬菌体再次侵染时,细菌的Cas基因及小片段DNA表达产物组成一种复合物,将入侵的噬菌体DNA切断使其失效。在该过程中,复合体上的crRNA起到____的作用,进而Cas9蛋白起切割噬菌体DNA的作用。由此可见,细菌这种抵抗噬菌体的功能相当于哺乳动物体内的______(选填“非特异性免疫”或“特异性免疫”)功能。
(2) 结合图1和图2所示过程的原理,实验人员成功将基因A精确导入绒山羊细胞内甲、乙两个基因之间,并和绿色荧光蛋白基因一起表达,避免了传统基因工程所引发的目的基因随机插入宿主细胞的安全问题。该技术称为CRISPR/Cas9基因编辑技术,其操作步骤如下:
第一步,切割。在一个基因表达载体上需要加入根据____和____序列设计合成的DNA片段,从而实现精准切割绒山羊DNA;
第二步,连接。另一个基因表达载体上需要加入甲基因片段、乙基因片段、A基因、绿色荧光蛋白基因四种DNA片段,以作为修复断裂DNA的模板,这4种基因片段在载体上的排列顺序应是____。
A. 甲基因—乙基因—A基因—绿色荧光蛋白基因
B. 甲基因—A基因—乙基因—绿色荧光蛋白基因
C. 乙基因—A基因—甲基因—绿色荧光蛋白基因
D. 甲基因—A基因—绿色荧光蛋白基因—乙基因
(3) 除了精确导入目的基因外,推测“CRISPR/Cas9基因编辑技术”还能实现的功能有____(多选)。
A. 去除细胞内的特定基因 B. 使细胞发生基因突变
C. 使细胞发生基因重组 D. 使细胞发生染色体变异