下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：

（1）过程①所用细胞是        ，过程②所用的原料和酶分别是                   。

（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增前需要人工合成     种引物备用，扩增时应在PCR扩增仪中加入          用以催化互补链的合成。

（3）若人生长激素基因两端具有限制酶pstⅠ识别序列，切割人生长激素基因和pBR322质粒时只用限制酶pstⅠ的目的是确保产生            ，切割时断开的键是           。

（4）过程④所用的酶是            ；过程⑤应选择                    型的大肠杆菌作为受体细胞，为提高转化率，首先用    处理大肠杆菌使其成为感受态细胞。

（5）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。将三角瓶内的大肠杆菌接种到甲培养基上的目的是筛选含           基因的大肠杆菌；接种到培养基乙上能存活的是导入含              质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是                        。

[生物——选修1：生物技术实践]

胡萝卜素可以预防白内障、增强视力，还可以预防夜盲症，同时也是一种常用的食用色素。可以从微生物和胡萝卜中进行提取，过程如下。请回答下列问题：

（1）若要得到纯化的酵母菌R，常采用的分离方法是________。配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是________。

（2）胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是________，该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子________。

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用________（方式）加热以防止温度过高；现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的________怍为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

去水卫矛醇是以从美登木（一种常绿灌木或小乔木）中提取的卫矛醇为原料合成的一种药物，对动物移植性肿瘤有广谱抗肿瘤活性，能抑制DNA及RNA合成，可直接杀伤慢性粘细胞白血病的幼稚粒细胞，并能显著抑制骨髓造血功能，使血红蛋白含量降低，红、白细胞数目减少。请回答下列相关问题：

（1）为获取更多的卫矛醇，科研人员对美登木进行了一系列研究工作，如图所示：

①获得C植株的技术手段是________。繁殖方式是________。如果利用此技术获得卫矛醇，也可以用________（按物理性质分）培养基培养________，然后在培养液中提取。

②利用A植株育种的优点是________。D植株的培育过程所用的主要原理有________，一般情况下其体细胞最多可有________个染色体组。

（2）为减弱在治疗用药过程中去水卫矛醇的毒副作用，可以让其和单克隆抗体相结合制成“________”。这一过程利用了单克隆抗体的________的特性，产生单克隆抗体的细胞叫________。

[生物——选修1：生物技术实践]

   生活中，部分食品或饮料与微生物的发酵密不可分。回答下列关于微生物的培养及其运用的问题：

（1）不同微生物对营养的需求存在一定差异，但都能归纳为4类营养，即水、________、氮源和________。

（2）为增加分泌高效果胶酶的微生物的浓度，应该用________（填写物理状态）培养基。探究不同微生物分泌的果胶酶的活性实验，所用材料是果汁，那么该实验的自变量是________。

（3）制备果酒时，发酵菌为________，该发酵菌能将葡萄糖转化成酒精和CO₂，如图是某同学设计的发酵装置，该装置的优点有________。

（4）制备果醋时，发酵菌在________（填”有氧、无糖”“无氧、有糖”或“有氧、有糖”）条件下，能将乙醇转化成________，进而转化成乙酸。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

如图表示试管牛的培育过程。请据图回答下列问题：

（1）试管牛培育过程中，用到的生物技术有________（至少答出两种）等。

（2）试管牛的生殖方式是________，其细胞核内的遗传物质来自于________。

（3）试管牛体外受精是在________溶液或________溶液中完成的。

（4）体外培养受精卵时，需要提供无菌、无毒的环境、________、适宜的温度和pH以及________。

（5）此项技术还被应用于人类，因此产生了试管婴儿和设计试管婴儿两项技术，与试管婴儿技术相比，设计试管婴儿技术的不同点是植入前对胚胎进行________，你对设计试管婴儿技术的观点是支持还是不支持？请说明理由？________，________。

高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从赤峰市克旗热泉（出口水温达87℃）中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示。请回答下列问题：

（1）I号培养基中应加入___________，以便挑选出能产生高温淀粉酶的嗜热菌。从I号培养基中挑选__________菌落接种到II号培养基中。

（2）②过程所使用的接种方法是___________________。如果不经过①过程，直接将采集的样品进行接种培养，可能出现的结果是________________________________。

（3）I、II号培养基接种菌种后，应该置于__________的恒温培养箱中培养，培养皿要倒置的原因是_______________________________。

（4）在高温淀粉酶运用到工业坐产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定。下图中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保持足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，如曲线②。根据实验结果分析：80℃并不是该酶使用的最佳温度，原因是____________________。曲线②35℃数据点是在_____________℃时测得的。

[生物--选修1：生物技术实践] 

由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有                                   。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以                作为唯一碳源。②、③过程需重复几次，目的是                                        。

（2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是                ；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

b

（1）如上图所示，菌株 A 和 B混合培养几小时后，把大肠杆菌洗涤后涂布在基本培养基的固体平板上，发现长出了若干野生型菌落，对此实验现象可作出如下假设：

① 不同大肠杆菌间遗传物质发生重组。 

②                                   。

（2）为了探究上述假设 ① ，有人设计了一种 U 型管（如下图），中间用过滤器隔开，大肠杆菌不能通过，但培养液和营养物质可通过，实验如下。请补充相关实验内容：

实验步骤：

① 在U型管中加入                            ；

② U型管两端各加入菌株 A、菌株 B，培养几小时；         

③ 将U 型管两端的大肠杆菌各自取出洗涤后涂 布在         上，观察有无菌落。

实验结果：                                   。

实验结论: 菌株 A 与菌株 B之间遗传物质发生重组。

（3）现有1升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为31、34、37，则每升原水样中大肠杆菌数为            。该数据理论上比细菌实际数目     。

（4）该实验中需要灭菌的是                                 。（至少写3个）

以下是从自然菌群中筛选理想菌种的主要步骤，请回答：

采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定→菌种保藏

（1）在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，因此筛选嗜盐菌应从____________中分离、纯化。

（2）富集培养是在将样品稀释涂布到鉴别菌种的培养基之前，可以通过____________增加目的菌株的浓度，目的是_____________________________________________。

（3）下图所示的操作是培养基配制过程的____________，该操作的正确使用顺序是：____________（用图中的序号和箭头表示）。②步骤需要培养基冷却到____________才能操作。③步骤操作的目的是____________________________________。

（4）对获取的菌种通常是在低温条件下进行短时间保藏，也可以利用甘油管藏的方法____________。

35-2.[生物——选修3：现代生物科技专题] 

回答下列关于胚胎工程方面的问题。

（1）胚胎工程是指对动物        或         所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。

（2）精子的顶体内含有              ，能协助精子穿过卵子的                。

（3）从供体母牛子宫内收集胚胎的方法叫          。

（4）在胚胎工程中，若要获得多个卵细胞，则需对母畜作            处理，若要出现“不同的母体产下性状相同的后代”这一现象，则应使用的技术为            。

（5）胚胎干细胞在功能上具有            性，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生            。

（1）巴氏消毒的方法是             。为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10mL生牛奶稀释到10^-4浓度后，取0.1mL滴在培养基上。

（2）将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是          。该涂布工具最合适的灭菌方法是____________。
  

 A．火焰灼烧    B．高温高压灭菌C．酒精擦拭    D．紫外线照射

（3）下图所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为________个。

（4）消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释培养法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动？__________________。 

（5）检测食品中大肠杆菌数量，可评价食品是否受到污染。下表培养基配方中，大肠杆菌能够生长的是______，理由是__________________。

（6）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入             ，具有              特征可以鉴别大肠杆菌。

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行      ，一般操作方法有两种，下图是利用                    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围           消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                          。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。

23.如图表示月季的花药离体培养过程，请回答：

（1）选择花药时，一般要通过_________来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，一般来说，在_________期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，通常选择_______________的花蕾，花药培养成功率最高。

（2）在花粉的培养基中要加入一定的植物激素，常用的植物激素有____________________。

（3）从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过_______阶段发育而来。

（4）图中的B过程需要_____，因为愈伤组织形成幼小植物后，植物需要叶绿素进行光合作用。

（5）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________指示剂培养几种细菌后，指示剂变红就可以判断其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入______________染料，培养几种细菌后，培养基中出现透明圈，就可以判断其中含有纤维素分解菌。