①制备培养基时   ②梯度稀释时    ③倒平板时    ④涂布时     ⑤长出菌落时

（2）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲,乙两种培养（成分见下表）;培养基甲______（填"能"或"不能"）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______________。

（4）在用稀释涂布平板计数法对纤维素分解菌数目进行统计时，统计的菌落数往往比活菌的实际_______________________。如果探究温度对纤维素酶活性的影响，应该保持______________、______________等不变(至少答两项)

分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题：

(1)培养基中加入的化合物A是________。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是______________________。

(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入________溶液，等培养基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现________。

(3)为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用________法进行接种。若用稀释涂布平板法进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是________________________________________________________________________。

(4)用三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定(结果如图)。

据图分析可知，三种菌株对________的降解作用最强。与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中________的降解率变化最大。

下图表示微生物培养与利用的相关实验技术，请回答下列问题：

 (1)在培养基的制备过程中，A表示      ，B表示灭菌，常用的方法是      。

（1）D是微生物接种最常用的方法之一，它包括         和         两步操作。

（2）在筛选土壤中分解尿素的细菌时，所用培养基以尿素作为       ；在统计菌落数目时，一般选择菌落数在       的平板进行计数。若要对分离的菌种作进一步的鉴定，可在选择培养基中加入       指示剂，若指示剂变       ，则可初步鉴定该种细菌能够合成       ，分解尿素。

（3）在纤维素分解菌的筛选实验流程中，F表示        。

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

(1)人们常从土壤中分离纤维素分解菌，对应的实验流程是：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品接种到________培养基上→挑选产生________的菌落．

(2)微生物培养时，将微生物接种到固体培养基上的方法有________和________，这两种方法所用的接种工具在使用前应分别进行________处理．

(3)葡萄糖 酒精，该阶段常用的发酵菌是________．发酵期间，培养液温度应控制在________，发酵装置必须密封的原因是________．