R－7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列(3′－UTR)结合，进而影响基因的表达。为研究R－7是否影响家蚕基因B(调控家蚕眼睛发育)的表达，科研人员将基因B中对应3′－UTR的DNA片段与荧光素酶基因(R－7不影响荧光素酶基因的表达)重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果。请回答：

(1)利用PCR技术扩增基因B对应3′－UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核苷酸序 列合成______________________。

(2)利用_____________________________________酶可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体(如图)上的位点_____________，构建重组载体。

(3)将重组载体与R－7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将_____________________、_____________________分别导入两组家蚕胚胎细胞。

(4)科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取________________，经处理检测后获得相对荧光值(在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光)，其结果如图。

(4)依据实验结果可推断，R－7影响基因B的表达，即通过遵循______原则，R－7与基因B所转录的mRNA的3′－uTR结合，进而__________(填"促进"或"抑制")基因B的表达。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有_________（至少写两个）。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的_________。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

​

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是__________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取___________技术。

(1) M13噬菌体的单链环状DNA复制开始时,首先需要通过转录过程合成一小段RNA,转录过程需要的原料是____。若M13噬菌体的单链环状DNA中各种碱基的含量为:a%A,b%G,c%T和d%C,则复制形成的双链环状DNA中,碱基A的含量为____。 

(2) 与实验一相比,实验二无M13双链环状DNA的原因是_______________________,实验三能检测到M13双链环状DNA的原因是________________。 

(3) 生物体内DNA复制过程中,子链延伸需要引物的原因是__________________________,子链片段在____作用下连接起来。 

(4) PCR技术通常需要长度为20~30个核苷酸的DNA片段作为引物,如果引物过短,则对扩增结果的影响是______________。 

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

（1）过程②利用的技术是_____________________，过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是____________________。

（2）过程③中获取的目的基因是__________________，可以根据该基因的___________________设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成基Rag₂基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有_________________________________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。

(1)图中①～⑤所示的生物工程为________。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的________，对现有的基因进行改造，或制造出一种新的________，以满足人类生活的需求。

(2)图中序号④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板碱基写在前)。

(3)若大量扩增目的基因，则用的是________(写出全称)技术，该过程需要的聚合酶的特点是________。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，在基因的首端必须有________；且在图中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含________性染色体的精子。

据图回答：

(1)获得A的一条途径是以A的mRNA为模板，在　　　　   酶的催化下，合 成互补的单链DNA，然后在　　　　的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因。

(2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有　　　　、模板、4种脱 氧核糖核苷三磷酸和　　　　，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为　　　　。

(4)在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是　　　　           。

(1)M13噬菌体的单链环状DNA复制开始时，首先需要通过转录过程合成一小段RNA，转录过程需要的原料是________。若Ml3噬菌体的单链环状DNA中各种碱基的含量为：a％A，b％G，c％T和d％C，则复制形成的双链环状DNA中，碱基A的含量为________。

(2)与实验一相比，实验二无M13双链环状DNA的原因是________，实验三能检测到M13双链环状DNA的原因是________。

(3)生物体内DNA复制过程中，子链延伸需要引物的原因是________，子链片段在________作用下连接起来。

(4)PCR技术通常需要长度为20～30个核苷酸的DNA片段作为引物，如果引物过短，则对扩增结果的影响是________。

（1）PCR技术的中文名称是                其过程分            、           、            三个步骤。                                   

（2） 加热至94℃的目的是使DNA样品的      键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过      酶的作用来完成的。通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA分子的合成遵循                                  。

（3）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用¹⁵N标记的模板DNA分子（第一代）放入  试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含¹⁵N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为           。

（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一   个人是否感染了某种病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（    ）

A．白细胞DNA   　        B．病毒蛋白质 　   

C．血浆抗体  　              D．病毒核酸

（5）将该目的基因导入动物细胞常用方法是                             

（1）据系谱图分析，该病为             染色体上的          性基因控制的遗传病，推测Ⅱ-3的基因型是               。

（2）该病患者由于垂体产生的             不足，引起侏儒症。

（3）研究人员采集了10位家系成员（系谱图中有编号的个体）的血样，提取了这些成员的DNA，采用                技术对该病相关基因—GHRHR基因片段（260bp，bp代表碱基对）进行大量扩增，然后用限制性核酸内切酶BstUⅠ对其切割，并进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳图谱如下图所示。

据系谱图和电泳图分析可知：

①该病患者GHRHR基因片段有         个BstUⅠ酶切位点。

②在提取DNA的部分家系成员中，            是致病基因的携带者。

③若Ⅱ-10与Ⅱ-11再生育一个孩子，这个孩子患病的概率是            。