科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶（BCE），该酶可以用于对抗生化武器。下图是转基因山羊的培育过程示意图，请据图回答问题：

（1）采用PCR技术扩增BCE基因的过程中需要加入的物质除目的基因和原料外，还需加入的物质是_______、__________。

（2）步骤②中将该重组DNA分子导入受精卵常用的方法是__________________法。

（3）为了获得更多的卵母细胞，往往需要向雌性山羊体内注入______激素。受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和__________。

（4）早期胚胎需要发育到__________（时期）才能进行步骤⑦。要同时获得多只与此转基因山羊遗传物质相同的小羊，可对囊胚进行_____操作。

(1) 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—^↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶             切割质粒，用限制酶            切割抗虫基因。①过程在         (填“体内”或“体外”)进行。

(2) 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有              的培养基上，若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。

(3) 为在短时间内大量获得目的基因，可用                技术进行扩增，其原理是                 。

(4) ⑤过程所用技术称为                  ，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有                     。

(1) 定点突变第一步得把突变位点设计在引物上,据图中信息人工合成短DNA引物应包含的序列是_______,突变位点一般设计在引物中间位置的理由是_________________,该定点突变技术是否成功的标志是________,该技术属于____工程的范畴。 

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（1）利用 PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

（2）设计引物是 PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

(1)我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得________、_________、延熟的转基因作物。

(2)引物是根据________的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是___________________________________________________________。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在_____________________________________________。

(3)PCR过程中温度从90℃降到55～60℃的目的是________________________________。

1为已知A、B、C三种基因对照，2、3、4为待测农作物样品

(5)与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是________________________________。

嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中 NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：

（1）图中的结构A是__________，其主要作用是__________。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有___________。

A：引物Ⅰ: ...GGGAATTC...；引物Ⅱ: ...CTCATATG...

B：引物Ⅰ: ...GAATTCCC...；引物Ⅱ: ...CATATGAG...

C：引物Ⅰ: ...GGAAGCTT...；引物Ⅱ: ...AAGCTTCC...

D：引物Ⅰ: ...CTCATATG...；引物Ⅱ: ...AAGCTTAAGCTT...

               图1

(1)甲、乙两种酶用同一种蛋白酶处理，酶活性与处理时间的关系如图1所示。甲酶的化学本质最可能是________。

图2

图3

① 使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为________。

② 在0 ℃和75 ℃时，酶的催化效率基本都为零。但当温度再度恢复到45 ℃时，后者酶的催化能力已不能恢复，这是因为________________________________。

图4

①a、b过程中，酶作用的部位依次是________。

② 若将获得的DNA片段用PCR技术进行扩增，与细胞内的DNA复制过程相比，利用PCR技术扩增DNA时所需酶的不同之处是____________。

下列甲、乙两图为获得生物新品种的过程示意图。请据图回答下列问题。

（1）检测目的基因是否转录出mRNA的检测方法是采用        技术。

（2）乙图为获得抗虫棉技术的流程。图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是       。在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kanR）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。因此，C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入         。

（3）随着科技发展，获取目的基因的方法也越来越多，乙图中的“抗虫基因”是利用甲图中的方法获取，③是在           （填“酶的名称”）作用下进行延伸的。

某质粒上有Sal I、HindIII、BamH I 三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

②使用农杆菌转化法时，要将目的基因插入到____________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞。    

根据下列所给材料回答问题：

材料Ⅰ：鱼的抗冻蛋白基因烟草细胞→抗冻烟草

材料Ⅱ：蜘蛛的丝腺蛋白基因羊的受精卵→转基因羊→产生丝腺蛋白

材料Ⅲ：人的胰岛素基因大肠杆菌→生产人的胰岛素

（1）上述生物新品种的产生所共同运用技术的核心步骤是                 。

（2）材料Ⅰ中，需要将鱼的抗冻蛋白基因与载体结合，作为载体必须具备条件之一是含有标记基因，该基因的作用是                。下图为含鱼的抗冻蛋白基因的DNA片段：

用该DNA片段经EcoRⅠ限制酶切割后共形成      个黏性末端，若图示DNA片段中EcoRⅠ限制酶识别序列的一个碱基突然改变，则可能发生的情况是                                           ；若需在短时间内获得较多的该外源基因，通常采用PCR技术,。该技术的反应体系的主要成分应包含：_______________（写四种）。其反应过程中引物与模板DNA链结合依靠                          原则完成。

（3）材料Ⅱ中，目的基因在羊乳腺细胞中表达，表达成功的标志是            ，为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，需用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的粘性末端不同)同时切割含目的基因的DNA片段和质粒。若用Ti质粒作为目的基因的载体，应选用下图中何种Ti质粒？                           

（4）材料Ⅲ中，将目的基因导入大肠杆菌，首先用       处理大肠杆菌，使之成为                           细胞。