(1) 定点突变第一步得把突变位点设计在引物上,据图中信息人工合成短DNA引物应包含的序列是_______,突变位点一般设计在引物中间位置的理由是_________________,该定点突变技术是否成功的标志是________,该技术属于____工程的范畴。 

用已学基因工程相关知识，解决以下问题：

A：下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列问题。

(1)  若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是

—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶_______________切割质粒，用限制酶_______________ 切割抗虫基因。①过程在___________(填“体内”或“体外”)进行。

B：多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：

(1)若已获取PG的mRNA，可通过____________方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_______________，以便根据这一序列合成引物。

(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用BamHⅠ和Smal两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和______。

请考生从给出的2道生物题任选一题作答，

一、[生物——选修1：生物技术实践]

 食物中的纤维素（即膳食纤维）对人体的健康也有着重要的作用，其主要含于蔬菜和粗加T的谷类中，有促进肠道蠕动，利于粪便排出等功能。但纤维素不能被人体吸收，因为人体缺乏分解纤维素的酶。某校生物兴趣小组开展了以下探究纤维素酶研究的T作，请回答下列问题：

 (1)纤维素酶是一种                  酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种，其中能够将纤维二糖分解为葡萄糖的是              。

 (2)自然界不少微生物具有分解纤维素的能力。取回的土样中含有多种微生物，兴趣小组在培养基中可加入   来帮助筛选纤维素分解菌，目标菌落的特征是存在着以该菌落为中心的        

 (3)马、牛、羊等食草动物也具有消化纤维素的能力。若从马的胃中分离出纤维素分解菌，与从土壤中分离相比较，除了要调整培养基的pH外，还必须控制的条件是__    __。配制好的培养基还应进行灭菌处理，一般采用的方法是                  

 (4)对筛选得到的微生物还需进一步纯化培养以增加菌种的数量，为方便后续的计数，宜采用的纯化方法是                    。

 (5)分离出的纤维素酶还需进一步鉴定。纤维素酶能催化纤维素分解为还原性的葡萄糖，根据这一特性，可加入                试剂并水浴加热，判断提取物是否起到了降解纤维素的作用。

二、[生物——选修3：现代生物科技专题]由李建远教授率领的科研团队，在山东烟台毓璜顶医院成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。请回答下列问题：

（1）在卵子去核的过程中，李建元教授采用三维立体偏震光纺锤体成像系统，对核DNA精确定位后，再用微激光主要对卵子的第一屏障打孔，才能精确剔除卵子细胞核。第一屏障是指             。

    A．卵黄膜      B．透明带     C．核膜

（2）在培养皮肤纤维细胞和淋巴细胞时，需要用胰蛋白酶等处理，原因是         。培养过程中除了保证无菌、无毒的环境外，为了防止培养过程中的污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的         。

（3）通过克隆胚胎进而用其衍生而来的器官，来取代患者本人病变的器官，就会避免免疫排异反应的发生，根本原因是         。当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对         。

（4）获得目的基因后可采用         技术进行扩增。大部分物种的基因能拼接在一起，是因为         。检测目的基因是否成功导入植物细胞，可采用的生物技术是         。

2013年，全球首批全基因组测序的PGD/PGS试管婴儿在长沙诞生。新技术的突破意味着通过设计试管婴儿解决部分不孕不育问题的同时，部分肿瘤疾病、遗传性疾病的家族性遗传也将有望避免。

(1)设计试管婴儿时为了提高受孕率，胚胎移植时多采用多胚胎移植，因此需要用________处理，促进母亲排出更多的卵子。胚胎发育的卵裂期在________(填“透明带”或“放射冠”)内进行。受精卵经72小时体外培养发育成有32个细胞左右的胚胎，叫________，可用于胚胎移植。

(2)目前SRY－PCR法是对胚胎的性别进行鉴定最有效最准确的方法。操作的基本程序是：从被测的囊胚中取出几个________(填“部位”)细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因(即SRY基因)的一段碱基作________，以________为模板进行PCR扩增。PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。每次循环需要经过____                     三步

【生物选修3：现代生物科技专题】（15分）油菜中油酸为不饱和脂肪酸，能降低人体血液的胆固醇含量，减少人体患心血管病的风险。F基因控制合成的油酸酯氢酶催化油酸形成饱和脂肪酸，转反义F基因油菜能提高菜籽油的油酸含量。请分析回答下列问题：

（1）从油菜细胞的染色体DNA获取F基因后进行大量扩增的方法为_____________。利用该方法扩增目的基因的前提是_____________________________。

（2）构建反义F基因表达载体时,需要用到的工具酶有___________；农杆菌可用来将反义F基因表达载体导入油菜细胞，从分子角度分析，其具有的特点是__________。构建反义F基因表达载体时没有设计标记基因，其可能的原因是___________________________。

（3）Le启动子为种子特异性启动子，将F基因反向连接在Le启动子之后构建了反义F基因。检测转反义F基因油菜细胞内F基因转录的mRNA含量，结果表明，因杂交形成双链RNA,细胞内F基因的mRNA水平下降。由此推测，反义F基因的转录抑制了F基因的___________(填“复制”“转录”或“翻译”)过程。若F基因转录时，两条单链(a1、a2)中a1为转录的模板链,则反义F基因转录时的模板链为_________________。