R－7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列(3′－UTR)结合，进而影响基因的表达。为研究R－7是否影响家蚕基因B(调控家蚕眼睛发育)的表达，科研人员将基因B中对应3′－UTR的DNA片段与荧光素酶基因(R－7不影响荧光素酶基因的表达)重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果。请回答：

(1)利用PCR技术扩增基因B对应3′－UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核苷酸序 列合成______________________。

(2)利用_____________________________________酶可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体(如图)上的位点_____________，构建重组载体。

(3)将重组载体与R－7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将_____________________、_____________________分别导入两组家蚕胚胎细胞。

(4)科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取________________，经处理检测后获得相对荧光值(在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光)，其结果如图。

(4)依据实验结果可推断，R－7影响基因B的表达，即通过遵循______原则，R－7与基因B所转录的mRNA的3′－uTR结合，进而__________(填"促进"或"抑制")基因B的表达。

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ四种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_____连接。

​(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是_____末端，所断开的化学键叫____键。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有____种不同长度的DNA片段。
(4)为了提高试验成功率，需要通过___技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
(5)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____。在导入重组质粒后，为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，需要用添加_____的培养基进行培养。

(6)目的基因D能“嫁接”到质粒上，其原因是_____（从DNA分子水平分析），在选出的大肠杆菌内基因D能成功表达的原因是_____。

下列有关生物技术的叙述正确的是

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗TMV 蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是具有重要经济价值的双子叶植物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV 的烟草，主要流程如下图所示。

(1)理论上，基因组文库与cDNA文库中含的基因区别是______________。

(2)科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程表示_______。

(3)④过程将重组Ti质粒导入烟草体细胞的常用方法是_______。

(4)过程⑥可采取_______的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过_______的方法来确定植株是否具有抗性。

质粒与目的基因具有相同的黏性末端，二者结合过程中一般会出现几种结合情况（ ）

下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据下图回答：

(1)在基因工程中，在②进入③之前要用_______________等工具来构建基因表达载体,基因的表达载体成分除了启动子之外还有_____________,将构建好的表达载体导入③的常用方法是__________________。

(2)从③到④的过程中一般利用未受精的去核卵细胞为受体，而不用普通的体细胞，原因是_________________。

(3)④到⑤的过程中正确的操作方法____，把⑤送入⑥的最佳时期是___________。

(4)⑦是⑥生出的后代，那么⑦的遗传性状和_______________最相似，要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体是_____。

(5)可以从哺乳动物的______________________中分离出来ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有_______________________。

下图是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

据图回答：

(1)(1)获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在______酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在_____的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的____________序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的_____________序列，再通过化学方法合成所需基因。

(2)利用PCR技术扩增基因A时，需要在反应体系中添加的有机物质有_____、______、4种脱氧核糖核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为__________________________。

(4)在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是________________________________________。