（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入________________________，在此过程中引物的作用是_____________________________________。

（2）BamHⅠ的识别序列为—G↓GATTC—，HindⅢ的识别序列为—A↓AGCTT—，选用这两种酶进行操作的意义是______________________________，除此之外，③过程还需要_____________酶。

（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为__________________________________________________________________。

（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的_____________（填“乳腺细胞”“去核卵细胞”或“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用____________的方法来处理胚胎。

实验者利用基因工程技术将某抗旱植株的高抗旱基因R成功转入到一抗旱能力弱的植株品种的染色体上，并得到如图所示的三种类型．

（２）基因工程育种的原理是_________。类型Ⅰ的细胞中导入了____个抗旱基因R。

（３）请设计实验证实某转基因抗旱植株属于以上哪种类型。

实验思路：_____________________________________，

实验结果与结论：

①若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅰ。

②若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅱ。

③若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅲ。

(1) 从功能上分析,35S是________识别和结合的部位,Nos的功能主要是________。 

(2) 过程①应利用________两种限制酶切割,酶切后回收载体A的大片段和CMO基因片段,加入含有______酶的缓冲液,获得载体C。进而在过程②中,利用________两种限制酶切割载体C和载体D,获得载体E。 

(3) 利用冻融法将载体E导入农杆菌中,制备成菌液LB。将无菌烟草叶片切成0.4 cm²大小,加入到菌液LB中浸泡10 min,以便__________。用无菌滤纸吸干叶片表面菌液,转入MS培养基,暗培养3天后转入到含有____的培养基中,筛选培养出含载体E的烟草若干株。 

(4) 利用DNA分子杂交技术检测发现呈阳性的烟草植株,再进一步利用抗原—抗体杂交方法检测到________均有表达的烟草植株。 

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟过程中PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：

(1)提取目的基因：若已获取PG的mRNA，可通过________法获取PG基因。在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有_______结合位点。得到的目的基因两侧需人工合成BamHⅠ黏性末端。已知BamHⅠ的识别序列如下图中甲所示，请在下图中乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，还需在培养基中加入_______。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞______现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与______互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄______，则可确定转基因番茄成功。

（２）基因工程育种的原理是_________。类型Ⅰ的细胞中导入了____个抗旱基因R。

（３）请设计实验证实某转基因抗旱植株属于以上哪种类型。

实验思路：_____________________________________，

实验结果与结论：

①若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅰ。

②若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅱ。

③若子代植株__________________________，则该转基因植株为类型Ⅲ。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

（1）过程①代表的过程是                     。

（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用                       两种工具酶。

（3）过程⑦的实验技术名称是                   ，在将X进行扩大培养之前，至少需要经过两次筛选，方法分别是                  、                        。

（4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的             所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行               比较，或用图中的               进行特异性结合来检测。

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒__________，选择的限制酶是______________。

（2）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒用EcoRI完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有__________或______________。

（3）导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入_________，形成的菌落颜色为_____________。

  Ⅱ．如图为某生物的一种多肽酶的基因内部和周围的DNA组成情况。其中标出了转录的起始部位（ini）和终止部位（ter），翻译的起始密码子对应序列（sta）的第一个碱基的位置，终止密码子对应序列（sto）的第一个碱基的位置，以及基因中内含子的界限（↓）（距离以kb表示，但未按比例画出）。

（1）转录的起始部位称为______，是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶__________________的部位。

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

I.如图是有关真核细胞内遗传信息传递的过程，

（1）图1所示过程是      。

（2）图2所示过程是      ，图2中①是        。

（3）图2所示多肽合成到Gly就终止，导致合成结束的终止密码子是    。

(1)图中A至D方向所示的途径表示________育种方式。

(2)B过程常用的方法是________________。

(3) E途径的其依据的育种原理是_____________。F途径的育种方法是             育种。

(4)由G过程最基本的工具酶有___________、__________________。

(5)G过程育种其依据的变异原理是_____________。

科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因。其技术过程如下(图中的■代表基因前的启动子)，据图回答：

(1)loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段，是由两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成，自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达，其碱基序列如下：

Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的________酶。从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的________。

(2)将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是____________。作为标记基因，抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是________。

(3)经检测成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会造成的安全问题是______________。经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子。由于__________________的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失。

(4)loxP序列是有方向性的。如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是________。

A．两个都是正向 B．两个都是反向 C．一个正向，一个反向 D．与方向无关

几种限制酶识别序列切割位点表

（1）假设所用的限制酶均能将所识别的位点完全切开，采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切含有目的基因的DNA，能得到________种DNA片段。如果将质粒载体和含目的基因的DNA片段只用EcoRⅠ酶切，酶切产物再加入DNA连接酶，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________________________________________________。

（2）为了防止目的基因和质粒表达载体酶切后的末端任意连接，酶切时应该选用的酶是________、________________________。