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            • 1. “白菜—甘蓝”是科学家用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种,它具有生长期短、耐热性强和易储存等优点。下图是“白菜—甘蓝”培育过程示意图,请完成下列问题:

              (1) 由杂种细胞D培育成白菜—甘蓝植株,采用的技术手段是______,该过程说明植物细胞具有____。 

              (2) 在d过程培养中,培养基的成分通常包括水、____、有机营养和____等,同时,在培养过程中,除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,成功的另一个关键是操作过程中必须保证____。 

              (3) 要获得图中白菜和甘蓝的原生质体,首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。现提供以下材料和用具:紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等。请从中选择合适的材料,完成下面检验是否已除去细胞壁实验的方法步骤,并预测和解释实验结果。

              主要实验步骤:

              ① 选取适宜浓度的蔗糖溶液,加入适量纤维素酶和果胶酶配制成的细胞壁分解液。其中选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是:适宜浓度的蔗糖溶液____。 

              ② 检验细胞壁分解液除去细胞壁的方法。

              第一步:用镊子撕取一小块紫色洋葱鳞片叶放在载玻片中央,滴加适量细胞壁分解液,制成临时装片,得到实验组装片。

              第二步:__________。 

              第三步:__________。 

              结果预测和分析:__________。 

            • 2.

              (1)若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现,这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高,______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株,可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

              (2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

              (3)获得目的基因,获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

              基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA,然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

              (4)卵巢经超数排卵处理后,要使用__________________确定卵泡的位置。     

               科研人员单独培养胚胎干细胞,首先需要在培养皿底部制备一层______细胞,称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞,用于移植。

              (5)植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

              A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

              C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

            • 3. (一)回答与基因工程和植物克隆有关的问题。
              (1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoR I酶切,在切口处形成_______。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接。在两个片段相邻处形成_______,获得重组质粒。
              (2)已知用CaCl2处理细菌,会改变其某些生理状态。取CaCI2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作,使重组质粒进入农杆菌,完成_______实验。在离心管中加入液体培养基,置于摇床慢速培养一段时间,其目的是_______,从而表达卡那霉素抗性基因,并大量增殖。

              (3)取田间不同品种水稻的幼胚,先进行_______,然后接种到培养基中培养,幼胚发生_______形成愈伤组织,并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织,再培养愈伤组织,以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有:培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及_______(答 2点即可)。


              (二)请回答从土壤中分离产脲酶细菌有关问题
              (1)LB固体培养基:取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl,加入一定量的蒸馏水溶解,再加_________,灭菌备用。
              (2)尿素固体培养基:先将适宜浓度的尿素溶液用______灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤,因为G6玻璃砂漏斗_______,故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中,备用。

              (3)取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液,分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上,培养48h,推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_____(A. 10-5稀释液+尿素固体培养基        B. 10-5稀释液+LB固体培养基     C. 10-4稀释液+尿素固体培养基         D. 10-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_____,其原因是细菌产生的脲酶催化_____分解产生_____所致。

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