人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体构建重组表达载体需要用到的工具酶有__________。基因表达载体中除了要有目的基因以外，还要有启动子，它是_________识别和结合点部位；除上述外还需有_____________________。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。

（2）为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵，采集的卵子必须发育到________(时期)；采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。生产上常用________期的胚胎进行移植；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。利用______________技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______，完成④过程的B细胞需要选择_________（时期）的卵母细胞。

（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射_______激素，超数排卵技术带来的危害之一是_________。

（3）细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是________________。

（4）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是____________。

（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行___________________。

下图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示培育优质奶牛的过程。请据图回答下列问题：

(1) 图1所示过程所用的生物技术有         。

(2) 将经免疫处理后的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选：一次是通过           培养基，筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过            检测，筛选出能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞。

(3) 通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别抗原X，其原因是该抗体具有                   的特点。

(4) 图2中的重组细胞         (填“①”或“②”)实现了基因的重组。

(5) 图2中的早期胚胎发育到         阶段才可以移植，在移植之前，需要进行质量检查，用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是                。

(6) 为了获得多个基因型相同的优质奶牛，可采用的技术手段是         。

（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入________________________，在此过程中引物的作用是_____________________________________。

（2）BamHⅠ的识别序列为—G↓GATTC—，HindⅢ的识别序列为—A↓AGCTT—，选用这两种酶进行操作的意义是______________________________，除此之外，③过程还需要_____________酶。

（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为__________________________________________________________________。

（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的_____________（填“乳腺细胞”“去核卵细胞”或“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用____________的方法来处理胚胎。

如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________________（限制酶）同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__________的培养基上进行。
（2）过程②代表的生物技术是__________，此技术对供体母牛、代孕牛进行选择后，并用激素进行的处理是_____________。如对囊胚阶段的胚胎进行切割，应注意____________________，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。
（3）若转基因牛的乳汁中不含人乳铁蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是_______________________________。

随着科学技术的发展，人们可以通过结合多种现代生物技术大量生产出人类需求量大的一些药物，如我国基因工程药物的研制和生产就已取得极大的成功。目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品，大致过程如图所示：

（1）哺乳动物的体外受精主要包括[a]____________、[b]___________和受精等几个主要步骤。若要充分发挥优良母畜的繁殖潜能，可给供体注射___________，使其排出更多的卵子。 

（2）在过程c中需要用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________识别、结合位点。  

（3）d过程常用的方法是____________，e过程的名称为_________，胚胎移植的实质是:早期胚胎在相同生理环境条件下______________的转移。 

（4）若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割技术，通常选择发育良好、形态正常的_________或桑椹胚。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题。

(1)要使人的生长激素基因在牛的垂体细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括目的基因、_________、__________________、标记基因等部分.在③之前要检测早期胚胎细胞是否已经导入人生长激素基因,宜采用_________________技术.③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段,可以采用______           _____技术,培育出多头相同的转基因牛犊。

(2)prG能激发细胞不断分裂,通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体,Ⅰ最可能是___________细胞,Ⅱ代表的细胞具有____              ________的特点.

(3)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，则与采用叶肉细胞相比较，其优点是_______________________________，⑤过程采用的技术是___________________________。科学家预言，此种“转基因抗虫棉”独立种植若干代以后，将出现不抗虫的植株，此现象来源于_______________。

胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题：

（1）应用1获得的小牛，其遗传物质来源于                                       。

（2）应用2中用用一定方法处理适龄良种母牛,可使其一次性排出比自然情况下多几倍到几十倍的卵子;若在卵黄膜和透明带之间观察到                          ,则表明受精已完成.刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为                    .这种试管牛的产生，采用的胚胎工程技术有                                                      .(至少答出2种)

（3）应用3中细胞C取自                                。

（4）应用4中通过                      技术获得二分胚①和②,得到的多个胚胎后植入代孕母牛体内.为保证胚胎移植的成功,胚胎的供体和受体应保持           .同时,可以通过取样                          细胞进行分子水平的早期胚胎性别鉴定。

（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到         ，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）供体母鼠通常情况下每次排卵8～12枚，为使其超数排卵，需注射         激素以排出更多的卵子，培养到            时期与获能的精子相遇时，精子首先发生                          

反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）①过程构成了基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中           能驱动基因的转录。

（4）采用显微注射技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入        培养液中继续培养。培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加         、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质。

（5）当胚胎发育至桑椹胚或囊胚时期，向        移植，为获得更多个转基因胚胎，要将内细胞团进行均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行            。

（6）若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用           技术对血液来进行检测。