A．[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列有关传统发酵技术在食品工业上应用的问题：

（1）果酒的制作过程中，常用的菌种是________。果醋制作过程中持续通入氧气的原因是________。

（2）检测酒精常用的试剂是重铬酸钾，其原理是在酸性条件下酒精能够使重铬酸钾呈________色。

（3）腐乳的制作过程中发挥作用的酶主要是________。豆腐块要加盐腌制，因为加盐可以抑制微生物的生长，原因是________。

腐乳制作完成后再封装时要将瓶口通过酒精灯的火焰，目的是________。

B．[生物——选修3：现代生物科技专题]

1998年我国培育出首只转基因羊，该转基因羊的乳汁中表达出人凝血因子IX蛋白，人凝血因子IX蛋白是治疗血友病的药物。请回答下列问题：

（1）生产转基因羊的过程中，最核心的步骤是________，为了在羊的乳汁中表达出人凝血因子IX蛋白，应将人凝血因子IX蛋白基因和________连接在一起。和目的基因紧邻的另一端还应含有________。

（2）重组DNA分子上标记基因的作用是________。要检测目的基因是否插入动物细胞的DNA上，常用的方法是________，原理是________。

（3）可利用胚胎分割技术获得多只转基因羊，当对囊胚期的胚胎分割时应注意________，目的是________。

【生物———选修3，现代生物科技】

日前，英国研究人员利用最新的3D打印技术，“打印”出了活体胚胎干细胞。实验证明，这些干细胞仍保持着人体胚胎干细胞的正常分化能力。科学家使用活体卵子及皮肤成纤维细胞，在实验室已成功克隆出了数个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的胚胎干细胞。请回答：

（1）自然状况下的胚胎干细胞是由哺乳动物的早期胚胎或     中分离出来的一类细胞。

（2）上述过程中要应用到的动物细胞工程技术有        、         。胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大,       明显；在功能上具有         。

（3）将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用                               技术。

（4）若选用囊胚进行胚胎分割，要注意对其          做到均等分割。

（5）胚胎移植是否成功，与供体和受体的生理状况有关。大量的研究已经证明，为胚胎在受体内存活提供可能的生理基础是                   。

【现代生物科技专题】基因疫苗指的是DNA疫苗，即将编码外源性抗原的基因插入到质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达出抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。口蹄疫是一种危害严重的偶蹄动物传染病，近年来国内外在口蹄疫基因疫苗研究方面有了许多新的突破．回答下列问题：

（1）获取目的基因后，可利用___________技术获得大量该基因，该过程所利用的酶必须具有___________的特点。

（2）将编码外源性抗原的基因插入到质粒上，此过程在基因工程中称作____________。

（3）将导入目的基因的受体细胞在体外培养至________________阶段后进行胚胎移植，选用的受体动物应符合的性别条件是___________。

（4）欲检测人或动物体内是否具有了抗原蛋白，在分子水平上检测的方法是从转基因人或动物中提取蛋白质，进行______________________。

（5）现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用_______________________技术形成多个重组细胞，经早期胚胎培养获得大量的重组胚胎，再进行____________________就会得到大量具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。

2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生，为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出________________________________，完成④过程的B细胞需要选择

______________________________________（时期）的卵母细胞。

（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射______________激素，超数排卵技术带来的危害之一是

______________________________________________________________________。

（3）细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是

______________________________________________。

（4）为了提高已有胚胎的利用率，可采用______________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是_________________________________。

（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行__________________________。

（1）基因表达载体含有目的基因、标记基因、启动子和终止子四个部分，其中启动子的作用是                 ，而终止子上特殊的碱基序列能够阻碍          的移动，并使其从模板链上脱离下来

（2）基因工程操作过程中，将目的基因导入植物受体细胞时，一般采用         法，选择        做运载体：若导入动物细胞则采用          法，而细菌作为受体细胞时应用          溶液处理使其成为感受态细胞便于吸收游离的DNA。

（3）动物细胞培养中需要使用胰蛋白酶而不是胃蛋白酶处理分裂能力旺盛的组织或器官，是因为                      。细胞培养时培养液中一般需加入动物血清，其作用是                                              。

（4）胚胎分割技术是指采用机械方法将早期胚胎切割成多个等份，然后经移植后获得同卵双胎或多胎的技术，因后代遗传物质相同，故我们可将此技术认为是   生殖。大量的实验证明同卵多胎成功的概率极低，其可能的原因是                             。

广东省肇庆市的鼎湖山是国家级自然保护区，里面动植物和微生物资源非常丰富，因其特殊的研究价值闻名海内外，被誉为华南生物“基因储存库”和“活的自然博物馆”。请根据资料回答下列相关问题：

（1）保护区内有与恐龙同时代、被称为活化石的古老孑遗植物桫椤，鼎湖山上所有桫椤植株所含的全部基因，叫做这个种群的____________；在基因工程中，受体菌群储存着桫椤的不同基因，称为这种植物的____________；获取桫椤基因并将其导入受体菌群需要的工具酶有__________________。

（2）2012年，有人在鼎湖山上发现了濒危物种懒猴，若想尽快增加这种懒猴的数量，可以通过胚胎工程的方法来实现。在胚胎分割时，一般采用发育良好、形态正常的_____________,要特別注意将____________均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。来自同一胚胎分割产生的后代具有相同的遗传物质，因此，胚胎分割可以看做动物____________的方法之一。

（3）在不影响保护的前提下，鼎湖山景区将科研、教育、生产和旅游等活动有机地结合起来，使它的生态、社会、经济效益得到充分展示，这体现生态工程的____________原理以及生物多样性的____________价值。

53．（20分）转基因克隆猪已经在我国培育成功。研究组首先从猪胎儿皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆。接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪。请回答：

（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的               ，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换            ，防止                   对细胞自身造成危害。

（2）筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的          。

（3）为了提高重组胚胎的利用率，可以对处于          阶段的胚胎进行均等分割。通过胚胎分割产生的两个或多个个体共有的特点是                            。

在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意                                                                 

（4）将重组胚胎移入到受体子宫后，由于受体子宫不会对外来胚胎发生          ，并能与之建立正常的          上的联系，因此，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪。在转基因克隆猪培育过程中应用生物                            工程技术。(至少答出两项)