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            • 1.
              科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞,最终表达出肺结核疫苗.请回答下列问题:
              (1)为获取MPT64基因,可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA,在 ______  的作用下合成双链cDNA片段,获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列 ______ (填“相同”或“不同”).
              (2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因,前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成 ______ ,在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是 ______ .
              (3)根据农杆菌的特点,如果将MPT64基因插入到 ______ 上,通过农杆菌的转化作用,就可以使目的基因进入胡萝卜细胞,并将其插入到植物细胞中的 ______ 上.要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达,应检测胡萝卜植株中是否含有 ______ .
              (4)研究发现,如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸,其保存时间将大大延长,科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是 ______ .
            • 2.

              害虫损伤番茄的叶片后,组成叶片细胞的细胞壁能释放出一种类激素物质,这种物质可以扩散到番茄的其他部位,诱导细胞内蛋白酶抑制剂基因的表达,合成蛋白酶抑制剂,导致害虫不能消化食物而死亡。科学家利用转基因技术把番茄的蛋白酶抑制剂基因转移到玉米,使玉米获得了与番茄相似的抗虫性状,有效抵御了玉米螟对玉米的危害。请结合上面的材料回答:

              (1)转移到玉米的番茄抑制剂基因最可能与玉米的__________结合在一起,成为玉米________________的一部分。

              (2)转移了番茄蛋白酶抑制剂基因的玉米合成番茄蛋白酶抑制剂的具体部位是_____________,合成的化合物可能还需要在_____________________加工才具有生物活性。

              (3)这种抗玉米螟玉米品种的培育技术属于_____________技术,这种变异在生物学上称为________________。

              (4)在种植了这种转基因玉米的农田中杂草是否也会出现抗玉米螟性状?________,原因是_________________________________________。

            • 3. 下图表示利用基因工程培育抗虫棉过程,请据图回答下列问题:

              1

              (1)若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—,限制酶Ⅱ识别序列和切点是—G↓GATCC—,那么在①过程中,应用限制酶_______切割质粒,用限制酶_______切割抗虫基因。

              (2)将通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有_______的培养基上,若能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒,反之则说明没有导入。

              (3)要确定抗虫基因导入后,是否能稳定遗传并表达,需进行检测和检定工作,则在个体水平上的鉴定过程可简述为:__________。经筛选分析,该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段,因此可以把它看作诗杂合子。理论上,该转基因植株自交产生的F1代中,仍具有抗虫特性的植株占总数的________。

              (4)⑤过程所用的现代生物技术称为______,从遗传学角度来看,根据细胞通过⑤过程,能形成棉植株的根本原因是跟细胞具有_________。

            • 4. 内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,它有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用.研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系.内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应.ETA是内皮素的主要受体,科研人员试图通过构建表达载体,实验ETA基因在细胞中高效表达,为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等尊定基础.其过程如下(图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为CCCGGG,限制酶XhoⅠ的识别序列为CTCGAG).请分析回答:

              (1)完成过程①需要的酶是 ______ ;与过程②相比,过程①特有的碱基配对方式是 ______ .
              (2)过程③中,限制酶XhoⅠ切割DNA;使 ______ 键断开,形成的黏性末端是 ______ .用两种限制酶切割,获得不同的黏性末端,其主要目的是 ______ .
              (3)过程⑥中,要用 ______ 预先处理大肠杆菌,使其处于容易吸收外界DNA的感受态.
              (4)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是 ______ .
              (5)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加.美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果,试解释: ______ .
            • 5.

              干扰素是治疗癌症的重要药物,它必须从血液中提取,每升人血液中只能提取0.5 μg,所以价格昂贵。美国加利福尼亚的某生物制品公司用下图的方式生产干扰素。试回答相关问题:

              (1)通常情况下,对供体和受体母牛选择后,要用激素进行___________。并用激素对供体母牛做_________处理。

              (2)为了实现干扰素的批量生产,早期胚胎进行移植之前要进行质量检测,并要求早期胚胎细胞中的性染色体组成为__________。选择发育良好的囊胚或________胚进行移植。为了提高胚胎利用效率,可在这两个阶段进行胚胎分割,胚胎分割可以看作动物________(填“有性”或“无性”)繁殖的方法之一。

              (3)近年来,关于胚胎干细胞的研究越来越多。胚胎干细胞具有发育的全能性,如图所示的细胞A和细胞B分别是________细胞、________细胞,可以从这些细胞中获得胚胎干细胞。

            • 6. .胰岛素 A、B 链分别表达法是生产胰岛素的方法之一.图1是该方法所用的基因表达载体,图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B 分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素 A、B链融合的蛋白).请回答下列问题:

              (1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是______.
              (2)图1中启动子是______酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是______.
              (3)构建基因表达载体时必需的工具酶有______.
              (4)β-半乳糖苷酶与胰岛素A 链或B 链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于______.
              (5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为______.
              (6)根据图2 中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量.你的推测结果是______,理由是______.
            • 7.

              如表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

              限制酶

              BamH Ⅰ

              Bcl Ⅰ

              Sau3AⅠ

              Hind Ⅲ

              识别序列及

              切割位点

                

              G GATC C

              C CTAG G

                  

                

              T GATC A

              A CTAG T

                  

                 

              GATC

              CTAG

                 

                 

              A AGCT T

              T TCGA A

                  

              (1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用________________两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于________态的大肠杆菌。

              (2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中_____________________________________________________。

              (3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为__________,对于该部位,这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

              (4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。

            • 8. 普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因,控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶,该酶能破坏细胞壁,使番茄软化,不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞,培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。下图为操作流程图,据图回答问题

              (1)实验中的目的基因是________________________________。

              (2)构建基因表达载体时必需的工具酶有_______________________________________。

              (3)图中步骤①→②使用的生物技术是____________。这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状,其原因是____________________。

              (4)根据图中转基因番茄细胞中的信息传递过程,分析转基因番茄抗软化的原因。________________________________________________

              (5)若将得到的二倍体转基因番茄植株自交,F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1,则可推测目的基因整合到了_____________。
              A.一对同源染色体的一条上 B.一对同源染色体的两条上

              C.两条非同源染色体上 D.一对同源染色体的非姐妹染色体上

            • 9.

              斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具体纯合突变基因(dd)的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白(G)基因整合到斑马鱼17号染色体上,带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体M和N进行如下杂交实验:

              (1)在上述转基因实验中,将G基因与质粒重组,将重组质粒显微注射到斑马鱼_________中,整合到染色体上的G基因_________后,使胚胎发出绿色荧光。

              (2)根据上述杂交实验推测

              ①亲代M的基因型是_________(选填选项前的符号)
              a.DDgg               b.Ddgg
              ②子代中只发出绿色荧光的胚胎基因型包括________(选填选项前的符号)。
              a.DDGG     b.DDGg     c.DdGG     d.DdGg

              (3)杂交后,出现红·绿荧光(既有红色又有绿色荧光)胚胎的原因是亲代_________(填“M”或“N”)的初级精(卵)母细胞在减数分裂过程中__________发生了交换,导致染色体上的基因重组。

            • 10. “CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法,CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分,SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破坏膜结构,使蛋白质变性,提高DNA在提取液中的溶解度;SDS能破坏膜结构,使蛋白质变性,EDTA能螯合Mg2+、Mn2+,抑制DNA酶的活性。某科研小组为了寻找提取腊梅DNA的优良方法,比较了两种提取DNA的方法,主要操作如下:

              实验测定结果如下(表中OD260反映溶液中核酸的浓度,OD280反映溶液中蛋白质的浓度。理论上,纯DNA溶液的OD260/OD280为1.8,纯RNA溶液的OD260/OD280为2.0)。
              CTAB SDS
              OD260 OD280 OD260/OD28 OD260 OD280 OD260/OD28
              0.003 0.018 1.833 0.006 0.005 1.200
              请回答下列问题。
              (1)与常温下研磨相比,液氮中研磨的优点是______;CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是______。
              (2)氯仿一异戊醇密度均大于水且不溶于水,DNA不溶于氯仿一异戊醇,蛋白质等杂质可溶于氯仿一异戊醇,实验过程中加入氯仿一异戊醇离心后,应取①______加异丙醇(异丙醇与水互溶)并离心进行纯化,利用异丙醇溶液纯化DNA的原理是______。
              (3)两种方法中,______法提取的DNA较多,其可能原因是______。
              (4)两种方法中,______法提取的DNA纯度较低,其含有的主要杂质是______。
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