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            • 1.

              石油是人类重要的化工原料之一,其在给人类生产生活带来便利的同时也对陆地和海洋造成污染,下图是科研工作者分离能分解石油污染物的假单孢杆菌的过程。请根据流程图回答下列问题:

              土壤取样→A→梯度稀释→涂布到培养基上→筛选目的菌株(假单孢杆菌)


              (1)A过程为___________,目的是增加假单孢杆菌的浓度,该培养基中应当以___________为唯一碳源。该实验过程中需要设置完全培养液对照组,将菌液稀释相同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明显___________(填“多于”或“少于”)选择培养基上的菌落数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。

              (2)实验中需要用___________对菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同浓度的菌液分别滴加到固体培养基的表面,用___________(器具)涂布均匀并进行培养,以便获得单个菌落。

              (3)若实验中用103倍的0.1mL的稀释液分别涂布三个平板,培养后分别形成了98、100和102个菌落,则每毫升原样液中含有假单胞杆菌___________个,实际值一般要比该测量值偏大的原因是___________。

            • 2.

              土壤中的纤维素分解菌能合成纤维素酶,从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程如下


              (1)纤维素酶包括_____________________。

              (2)题干中第二个步骤是______________,目的是_______________。该步骤要使用液体培养基进行振荡培养, 振荡培养的作用是            (答出1点)

              (3)第三步骤梯度稀释后,用________________(接种工具)将菌种接种到培养基的表面。

              (4)将适量的_________染料滴加在平板中的菌落周围,如果菌落周围出现__________则说明此种菌能够分解纤维素,从平板中挑取实验效果明显的目的菌株。

              (5)如果我们要长期保存纤维素分解菌,可以采用____________方法保存。

            • 3. 植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解,回答下列问题

              (1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中葡萄糖苷酶可将___________。纤维素分解菌的筛选方法叫_________法。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_________。

              (2)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲,乙两种培养(成分见下表);培养基甲______(填"能"或"不能")用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是______________。



              (3)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养,结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中________的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高________的利用率。

              (4)在用稀释涂布平板计数法对纤维素分解菌数目进行统计时,统计的菌落数往往比活菌的实际_______________________。如果探究温度对纤维素酶活性的影响,应该保持______________、______________等不变(至少答两项)

            • 4.

              某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

              (1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_  _______,这种培养基属于________培养基。

              (2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____  ____,实验需要振荡培养,由此推测目的菌的代谢类型是异养________型。(填“需氧”或“厌氧”)

              (3)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液,接入新的培养液中连续培养,使目的菌的数量________。(两空均填“增加”或“减少”)

              (4)在上述实验操作过程中,获得纯净目的菌的关键是防止____            ___。

              (5)转为固体培养基时,常采用                        进行接种,所用的接种工具分别是________________和               。

              (6)实验结束后,使用过的培养基应该进行__________处理才能倒掉,以防止微生物的扩散。

              (7)通常情况下,培养基用                  方法灭菌,培养皿用         灭菌。待培养基冷却到        ℃(填20、30、40、50)左右时,在                     附近倒平板,等平板冷却凝固后将平板倒置,可以防止                     ,以免造成污染。
            • 5.

              请回答下列与微生物培养相关的问题:

              (1)土壤中具有分解尿素的细菌,此类细菌能产生________酶,该酶能将尿素分解成____________。

              (2)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌,并统计每克土壤样品中活菌数目,培养基配方如下。将各种物质溶解后,用蒸馏水定容到1000ml,再经高温灭菌,制成固体培养基备用。

              KH2PO4

              Na2HPO4

              MgSO4·7H2O

              蛋白胨

              葡萄糖

              尿素

              琼脂

              1.4g

              2.1g

              0.2g

              1.0g

              10.0g

              1.0g

              15.0g

              根据培养基的成分判断,该同学能否分离出土壤中能分解尿素的细菌?__________(填“能”或“不能”),原因是__________________。

              (3)某小组采用平板划线法分离某样品的细菌时,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是_______________________________。使用稀释涂布平板法检测土样中细菌含量时,在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间,这样做的目的是_________________。

              (4)在分离尿素分解菌的实验中,大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落,而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落,这种实验结果差异产生的原因可能是________________、_______________。

            • 6.

              为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌,研究人员进行了如下实验:

              ①制备含3%NaCl的固体培养基,以及含3%、5%和7%Nacl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基;

              ②将高盐度废水采用平板划线法接种到含3%NaCl的固体培养基,如图一。然后置于适宜条件下培养一段时间,观察形成的菌落特征;

              ③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上,适宜条件下培养适当时间,将试管置于4℃冰箱中保藏待用;
              ④取固体斜面上的菌株制成菌液,取等量菌液,分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时,定时取样统计活菌数目。测定结果如图二所示。

              回答下列问题:
              (1)配制培养基时,灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是________________________。
              (2)步骤②平板划线操作过程中,第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染,第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是________________。完成图一所示操作,至少需要灼烧接种环__________次。
              (3)步骤④中常采用_____________法统计活菌数目。直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的,正确的操作是_____________________________________。若每种浓度设3个重复实验,每次统计活菌数目时,需要从_____________个培养瓶中取样。

              (4)由图二可知,该耐盐菌最适合处理含________(浓度)NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时,需要_________________(合理措施),才能达到理想效果。

            • 7.

              某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

              (1)为了缩短泡菜制作时间,可在冷却的盐水中加入少量陈泡菜液,目的是___________________。

              (2)泡菜液中的乳酸的产生场所是乳酸菌的___________。在制作泡菜初期,泡菜坛水槽总是有气泡冒出的主要原因是_______________。随着泡制时间的延长,泡菜坛中亚硝酸盐的含量变化趋势为__________

              (3)为分离纯化出优质的乳酸菌,应挑选_________________的菌落作为候选菌。

              (4)乳酸菌发酵产酸奶,发酵到后期时,发酵速度逐渐变缓甚至停止,主要原因是:___________________。

            • 8.

              在白酒发酵的窖池中,培养液的pH≤4.5后,酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制,甚至停止发酵。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的环境下继续表现出较强发酵能力,适宜作白酒发酵生产用菌种。为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌,研究者进行实验。

              (1)酵母菌的呼吸作用类型是________。在发酵过程中,窖池中培养液的pH会逐渐下降,原因是___________________________。

              (2)取适量窖底泥、酒糟和黄浆水,分别溶于10 mL________中,再各取1 mL上清液接入10 mL麦芽汁培养基中培养,2天后分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上,培养结果见下表。

              菌种来源

              pH

              窖底泥

              酒糟

              黄浆水

              5.0

              + + + + +

              + + + +

              + + + +

              4.0

              + + + +

              + + +

              + + + +

              3.0

              + + +

              + +

              + + +

              2.5

              + +

              +

              +

              2.0

              +

              -

              -

              注:“+”越多表示菌体长得越好,“—”表示几乎不生长。

              (3)在pH≤3.5的环境下,仍可检测到少量耐酸性酵母菌生长,这些菌株是________形成的。

              (4)从pH为________的培养基中获得菌种,可通过________法接种到培养基上,进行纯化培养。

              (5)实验获得了三个耐酸性强的酵母菌菌株,特点如下表。

              菌株

              A

              B

              C

              特点

              pH≤3.5时,生长代谢正常、优于其它常规菌种

              pH≤3.5时,生长代谢正常,pH4~6时不正常

              pH2.5~6,生长代谢正常、优于其它常规菌种

              依据菌株特点,研究者认为C菌株更适合作为白酒发酵菌株,作出这一判断的理由是_____________________________。

            • 9.

              分离筛选降解纤维素能力强的微生物,对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基,成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题:

              (1)培养基中加入的化合物A是________。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养,目的是______________________。

              (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物,向培养基中加入________溶液,等培养基上长出菌落后,能产生纤维素酶的菌落周围会出现________。

              (3)为在培养基表面形成单个菌落,若以接种环为工具,则用________法进行接种。若用稀释涂布平板法进行接种,在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是________________________________________________________________________。

              (4)用三种菌株对秸秆进行处理,并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定(结果如图)。

              据图分析可知,三种菌株对________的降解作用最强。与第5天结果相比,第10天秸秆各组分中________的降解率变化最大。

            • 10. 水污染是全球性的环境问题,微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物,PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA,PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物,当PVA被分解时蓝绿色复合物消失,形成白色透明斑,请回答下列问题:

              (1)要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌,应采用以______________作为唯一碳源的选择培养基,实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明显______________ (填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。

              (2)要测定土壤稀释液中微生物的数目.可在显微镜下用______________计数板直接计数。若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后,取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面,测得菌落数的平均值为160个,空白对照组平板上未出现菌落,则100 mL原菌液中有PVA分解菌_________个,该方法的测量值与实际值相比一般会___________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。

              (3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入______________,用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小,用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株.一定时间后,通过测定______________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。

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