【生物—选修1：生物技术实践】

甲、乙、丙三个生物兴趣小组分别按如下三个流程进行课外探究活动，据此结合所学知识回答下列问题。

兴趣小组乙  植物组织→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→试管苗

（1）甲组同学在制作腐乳过程中，先将切好的豆腐块放置在笼屉内，为使毛霉发酵充分，必须提供适宜的温度和          等条件：豆腐块上生长的毛霉菌丝来自于                          ；密封腌制时添加卤汤，卤汤中的酒的含量应控制在12%左右，酒精含量过高会导致                      。               

(2)乙组同学欲按此原理生产蝴蝶兰组培苗，在诱导丛芽和诱导生根的再分化培养过程中，培养基的不同之处主要是                                       。

（3）丙组同学欲按上述流程统计被苯酚污染的土壤中能高效降解苯酚的某菌株的数量。其流程中土壤样品稀释后应该采用稀释涂布平板法接种于以         为唯一碳源的培养基上。该组同学在稀释倍数为10⁴的培养基中测得平板上菌落数的平均值为30.4，则每毫升样品中的菌落数是          个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2毫升)。实验结束后，使用过的培养基应该进行             处理后，才能倒掉。

存在于蔬菜和粗加工的谷类中的纤维素（即膳食纤维）对人体的健康有着重要的作用。但纤维素不能被人体吸收，因为人体缺乏分解纤维素的酶。某校生物兴趣小组开展了以下探究纤维素酶研究的工作，请回答下列问题：

（1）纤维素酶是一种复合酶，包括C₁酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种，其中能将纤维素分解为纤维二糖的是________、________。

（2）土壤中不少微生物都具有分解纤维素的能力，可从枯枝落叶多的腐殖土中采样，还可以将富含________的物质埋在土壤中。取回的土样中含有多种微生物，在培养基中加入________染料来筛选纤维素分解菌，该染料可与纤维素形成________复合物，将来以培养基中________的出现做为筛选纤维素分解菌的依据。

（3）牛、羊等食草动物也具有消化纤维素的能力。若从牛的胃中分离出纤维素分解菌，与从土壤中分离出的纤维素分解菌相比较，除了要调整培养基的________外，还必须提供________环境。

[生物选修1：生物技术实践]

   甘蔗是一种高光效的植物，单位面积产量很高，目前已成为燃料酒精生产的重要原料。与化石燃料相比，酒精燃料可以再生，而且二氧化碳排放量少，具有低能耗、低污染、低排放的特点，为基础的低碳经济模式。

（1）利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为甘蔗—榨汁（蔗糖）—酵母发酵—蒸馏—成品（燃料酒精）—蔗渣由微生物分解再利用。具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：

步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。

步骤2：从野生菌液中分离出理想的酵母菌菌种，需要用到________培养基，制备该培养基时要注意________和________。加琼脂后灭菌，制成固体培养基。为防止培养皿出现冷凝水影响菌落生长，需将培养皿________。

步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释，涂布在固体培养基的表面。接种操作一定要在酒精灯火焰附近进行，原因是________。

步骤4：根据是否能在该培养基上生长筛选出突变菌。由上述步骤筛选出的酵母菌与野生酵母菌相比，具有________的特点。

（2）利用获得的突变菌和榨汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间洁净外，发酵过程中防止外来杂菌入侵可行的方法还有（列举一种）________。

（3）酵母菌不能分解蔗渣，因其不含有能够分解蔗渣的________酶。若从土壤中分离具有这种酶的微生物，所需要培养基中的碳源为________。

[生物——选修1：生物技术实践]

新鲜的泡菜滤液中含有乳酸菌，可作为实验材料分离纯化乳酸菌。请回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行________，这样做的理由是________。

（2）分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而使培养基在分离纯化过程中会形成________。

（3）若要长期保存乳酸菌，菌液中常需要加入一定量的________（填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”），且要放置在________（填“－5”“－20”或“－100”）℃的冷冻箱中。若要短期保存乳酸菌，可将菌种接种到试管的________（填“溶液中”“固体培养基表面上”或“固体斜面培养基上”），菌落长成后，将试管放置在________（填“－4”“0”或“4”）℃的冰箱中保藏。

巴氏芽孢杆菌是一类具有较高脲酶活性的细菌，广泛分布在土壤、堆肥及污水中，是兼性厌氧型的细菌，在强碱性培养基中生长良好。这种细菌能够将氮肥中的尿素分解成氨态氮，这样才能被植物吸收，对于增强土壤肥力有着重要的作用。

（1）一般巴氏芽孢杆菌是从被称作“微生物天然培养基”的           中分离出的，一般采用                    的固体选择培养基，置于恒温箱中培养。

（2）培养瓶培养一段时间后，菌体会沉入下层，为了测定菌液中的活菌数，一般采用               ，吸取培养瓶中菌液时要先               ，如果没有进行这样处理，直接吸取进行测量，会造成结果                 ，原因是                                                                 

（3）实验结果表明，巴氏芽孢杆菌培养时单位体积培养液中菌体数随时间先增加后减少。培养后期巴氏芽孢杆菌数量急剧下降的原因是              

                                               。

（1）为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用     法将初筛菌液接种在    （固体/液体）培养基上，这种培养基属于     （鉴定／选择）培养基。

（2）关于制备固体培养基的叙述，错误的是     。

A．制作固体培养基时可以加入琼脂

B．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板

D．顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

（3）下表的培养液pH均为4.8，若对MC﹣1中纤维素酶的活力进行测定，则不能选择表中的哪几种培养液     ？（多选，填字母）

A.A   B.B   C.C   D.D

（4）某同学发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入     指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入   染料培养后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。