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            • 1． 多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．如图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤．请回答：

              （1）步骤①～③的培养过程中，培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源，目的是______．
              （2）步骤①～③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，另一方面能______．
              （3）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是______．
              采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是______．
              （4）接种环通过灼烧来灭菌，完成步骤④中划线操作，共需灼烧接种环______次．
              （5）为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K，为了比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：
              ①取9个锥形瓶均分成三组，编号为A、B、C．
              ②______．
              ③______．
              ④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃菲的降解率．
              难度：难
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            • 2． 酵母菌通过基因突变能产生营养缺陷型菌株，由于营养缺陷型菌株丧失了合成氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等的能力，不能在基本培养基中生长，必须在基本培养基中补充某些物质才能生长。如图简要表明了科学研究者用紫外线处理野生型啤酒酵母菌单倍体获得其营养缺陷型菌株的方法。

              根据以上叙述，回答下列问题：
              （1）若用紫外线处理二倍体酵母菌，除通过基因突变产生营养缺陷型菌株外，涉及的变异类型还可能有______；选用单倍体酵母菌的好处是______。
              （2）酵母菌细胞中质粒上的基因______（遵循、不遵循）孟德尔遗传规律，其主要原因是______。
              （3）BrdU是一种嘧啶类似物，酵母菌在繁殖过程中摄取BrdU并替代胸腺嘧啶脱氧核苷酸的位置掺入到新合成的DNA链中。含BrdU的DNA的酵母菌因其比正常的DNA更容易被紫外线破坏而死亡，不繁殖的酵母菌由于不能利用BrdU，其DNA对紫外线不敏感而存活下来。若图中的营养缺陷型是甘氨酸营养缺陷突变型，请利用上述原理将突变型菌株从野生型菌株中筛选出来并大量繁殖（要求：写出完整的实验步骤）。______。
              难度：难
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            • 3．
              国家标准规定每毫升酸奶产品中乳酸菌菌数不得低于1×106．为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达到国家标准，某兴趣小组进行了如下实验，请回答下列问题：
              （1）制备培养基：培养基的碳源为 ______ （填“含碳无机物”或“含碳有机物”）．检测培养基灭菌是否合格的方法是 ______ ．
              （2）样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取25mL酸奶样品加入盛有 ______ mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀．然后进行系列稀释操作，得到稀释至106、107、108倍的样品．
              （3）培养与统计：吸取不同稀释度的样品各1mL，分别置于不同培养皿内，加入适宜温度的溶化状态的培养基，使之混合均匀，冷却成平板．每个稀释度做3个重复．在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计，结果如表：
              稀释度（倍） 106 107 108
              平板 1 2 3 1 2 3 1 2 3
              平板菌落数（个） 432 421 445 78 67 74 9 6 8
              为了保证结果准确，应选择上述稀释度为 ______ 倍的平板菌落数作为统计结果，计算出样品中每毫升乳酸菌数为 ______ ．
              （4）测定微生物的数量常采用稀释涂布平板法，其统计的数值往往比实际数目 ______ ，原因是 ______ ．
              难度：难
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            • 4．
              有人尝试制备始旋链霉菌（能生产普那霉素的一种原核放线菌）的原生质体，并利用其孢子和原生质体进行选育普那霉素高产菌株的实验．采用酶解法制备始旋链霉菌原生质体时，先要明确酶解时间与原生质体制备效果间的关联．探究步骤如下：
              第1步：取生长旺盛的始旋链霉菌菌丝，酶解后用一定量的缓冲液稀释后涂布在平板上，30℃培养7天后，统计菌落数．
              第2步：计算时间对原生质体制备和再生的影响，绘制成下图1所示曲线．
              请据图回答：

              （1）本实验所用的酶，不适用于制备 ______ 的原生质体．
              A．大肠杆菌细胞  B．番茄叶肉细胞 C．酵母菌
              （2）鉴定原生质体制备效果的常见方法是将部分原生质体放在 ______ （“等渗”、“高渗”或“低渗”）溶液中，观察其形态变化．而原生质体的计数统计常借助光学显微镜、盖玻片和 ______ 等光学仪器．
              （3）上述实验的第1步中，酶解后的稀释必须用缓冲液的原因是 ______ ，若未经稀释，直接涂布可能造成的结果是 ______ ．
              （4）根据上图1可见，随着酶解时间增加，原生质体的再生率变化趋势是 ______ ．结合酶解时间对原生质体制备率和再生率的影响，应当选择的最佳酶解时间约为 ______ min．
              （5）用紫外线分别处理始旋链霉菌孢子、原生质体后，统计各组菌株的普那霉素产量，结果如上图2．诱变后效果最好的是丙组，可能的原因是 ______ ．
              难度：难
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            • 5．
              为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作．
              （1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是 ______ ．制备的培养基常用 ______ 法进行灭菌．
              K2HPO4 MgSO4 NaNO3 FeSO4 琼脂
              0.1g 0.5g 3g 0.01g 2g 15g 加至1L
              （2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行 ______ ，用 ______ 法接种于固体培养基上．接种后的培养基 ______ 状态放入培养箱．
              （3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和 ______ 直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
              （4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的 ______ （填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将 ______ 与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．
              难度：难
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            • 6．
              回答下列有关生物技术实践的问题．
              （1）PCR的反应过程包括 ______ 三步．整个PCR反应过程中需要适宜的温度和酸碱度，前者由PCR仪自动控制，后者需靠 ______ 来维持．
              （2）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 ______ 和 ______ ．除此之外，培养基还必须含有基本成分是 ______ 和 ______ ．对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 ______ ．
              （3）某同学尝试微生物接种的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图所示．该同学的接种方法是 ______ ；推测该同学接种时可能的操作失误是 ______ ．
              难度：难
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            • 7． 高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性．研究者从热泉嗜热菌样品中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示：

              （1）进行①过程的目的是 ______ ，②过程所使用的接种方法是 ______ 法．
              （2）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于 ______ 培养基，配制时仅以 ______ 作为唯一碳源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时应加入 ______ 作为凝固剂．
              （3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是 ______ ．一般对配制的培养基采用 ______ 法灭菌．
              （4）培养一段时间后，应从Ⅰ号培养基上挑出 ______ 的菌落，接种到Ⅱ号培养基上．
              难度：难
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            • 8． 有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解、分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示．

              （1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是______．
              （2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和______，这些植物激素一般需要事先单独配制成______保存备用．
              （3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是______，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有______．
              （4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液作图乙所示实验，该实验的假设是______，该实验设计是否合理？为什么？______．
              难度：难
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            • 9． 泡菜是一种历史悠久的大众喜爱的发酵蔬菜制品。研究发现，乳酸菌是泡菜生产中的主要生产菌种，但不同乳酸菌的繁殖周期不同。蔬菜在腌制过程的某些阶段也会产生较多的亚硝酸盐。为了获得生产周期短、亚硝酸盐含量低的泡菜，某兴趣小组进行了菌种的筛选（过程如图所示）和相关研究。（假设不同乳酸菌在一个繁殖周期中产生酸量相近。）

              （1）乳酸菌的培养条件除了适宜的温度、pH之外，还必须保证________条件，初筛、复筛宜选择________（固体或液体）培养基，将乳酸菌接种培养时常采用________方法。

              （2）当复筛的培养基中出现________即可接种到斜面保藏，增殖培养易选择________（固体或液体）培养基。

              （3）从实验的目的分析。性能测定主要是测量确定乳酸菌的________和蔬菜腌制过程中________。

              （4）在腌制过程中，坛中会出现溶液量增多现象，主要原因是________。

              （5）封坛一段时间后，开坛测定亚硝酸盐含量的变化，并进行实验数据的记录筛选合适的乳酸菌作为菌种来制作泡菜，最佳食用泡菜的时间，应该选择________时间段食用。

              难度：难
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            • 10．

              某研究小组为探究某种新型抗生素A的抑菌效果，将一组相同圆纸片放入不同浓度的A溶液中浸泡后，放在接种有大肠杆菌的培养基上培养，实验结果如图．请分析并回答下列问题：

              （1）培养基配制的基本流程是_____________.

              （2）将装有培养基的灭菌包装入           中灭菌，加热初期，必须先将锅内的            彻底排除后，将锅密闭，再继续加热灭菌．

              （3）倒平板时，待平板冷却凝固后，应将平板倒过来放置，倒置的原因是          ，倒置后用记号笔在培养皿的        （填“皿盖”或“皿底”）上标明培养基的种类、培养日期、平板上样品的稀释度、培养微生物名称及制作者姓名等信息．

              （4）该实验中，宜使用 方法接种大肠杆菌，在培养和接种大肠杆菌时要特别注意进行无菌操作．为了避免无关变量对实验结果的影响，对圆纸片的要求是          ．实验结果表明，对大肠杆菌抑制作用最明显的是浓度为⑤的A，原因是              ．

              难度：难
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