【生物——选修1：生物技术实践】

从自然菌样中筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适宜的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。筛选噬盐菌的菌样应从____________环境中采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_____________的培养基，并在__________条件下培养。

(3)如图甲、乙是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。

获得图甲效果的接种方法是________________，获得图乙效果的接种方法______________。

(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行____________，培养基的灭菌方法是________________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在____________条件下进行。

1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有1 L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1 mL至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释至10³倍。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样品中菌体数为________。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养基的特点是___________________________。

(3)接种技术的核心是___________________________。接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步____________________________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

(4)在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是________，有透明圈菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。实验结果如下图所示，A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。

回答下列相关问题：

（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水水样滴加进去振荡均匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化是                    。

（2）图乙中滤膜的孔径应______（“大于”、“小于”或“等于”）大肠杆菌。

（3）制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是          ，待培养基冷却至   ℃左右时进行倒平板。

（4）为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入                染料，该研究机构通过统计______色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际值          ，（“偏高”、“偏低”或“相等”） 理由是                                                          。