金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。

（2）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

（3）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏引物与模板之间的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。

（4）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____(填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物)。

下列技术与原理不相符的是（ ）

金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理．PCR扩增过程示意图如图，请回答下列问题：

干旱会影响农作物产量，科学家们对此进行了研究。如图为用探针检验某一抗旱植物基因型的原理，相关基因用R和r表示。

（1）基因R与r的本质区别是______________________________的不同。在利用PCR技术扩增R或r基因过程中，利用_____________可寻找抗旱基因的位置并进行扩增。

（2）若被检植株发生A现象，不发生B、C现象，则被检植物的基因型为__________________。

（3）用从基因文库中获取目的基因的方法获取抗旱基因时需要用到限制酶，限制酶的具体作用部位是________________________。 

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，其依据主要是：当植物受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的__________________________________________________________________________________________。

（5）经检测，抗旱基因已经导入烟草细胞，但未检测出抗旱基因转录出的mRNA，从构建基因表达载体的角度推测，最可能的原因是________________。

在遗传病监测及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题：

（1）在PCR中先用95℃高温处理的目的是____________；而这一过程中在细胞内DNA复制时是通过____________的催化实现的。PCR反应体系中DNA聚合酶与细胞内复制相比，最大的特点是____________。

（2）在PCR技术中所需要的引物实质上是一种____________，在相应的横线上写出引物Ⅱ____________。

（3）在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA： __________（写出①、②中的一种即可）。

（4）若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入____________个引物。

（5）在对样品DNA进行分析的过程中发现，DNA掺杂着一些组蛋白，要去除这些组蛋白可加入的物质是____________。

将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是_____________________。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。                            。

（3）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为__________。

（4）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 

乙烯具有促进果实成熟的作用，ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的关键酶。转反义ACC合成酶基因番茄具有耐储存、宜运输的优点。下图为反义ACC合成酶基因表达载体的结构示意图，请据图回答：

（1）提取ACC合成酶的mRNA时，宜选用成熟番茄的果实组织，原因是____________________。

（2）将图中表达载体与农杆菌菌液混合后，加入含有________________________的培养基中，可筛选出转化了反义ACC合成酶基因的农杆菌。将ACC合成酶基因反向接在35S后构成反义ACC合成酶基因,在检测反义ACC合成酶基因是否整合到番茄植株的染色体DNA上时，_________(填"能"或"不能")用放射性物质标记的ACC合成酶基因片段做探针进行检测，理由是___________________________________________。

（3）图中35S为特异启动子，推测35S应在番茄的_______________(器官）中启动转录过程。转录启动后，检测发现番茄果实中乙烯含量显著降低，推测反义ACC合成酶基因的作用机理可能是_________________________________________________________________。

下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                    等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有         、           个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取         作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要         个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发           色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

RT- PCR是将RNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如下图所示：

（1）过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、       、             和引物A等。

（2）过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是       ，该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受           ℃ 。

（3）过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要        个引物B。

（4）利用RT—PCR技术获取的目的基因        （填“能”或“不能”）在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是       。

 （5）RT—PCR过程中主要借助对          的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行。

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答：

（1）②所示的生物技术名称是________，该项技术的供体细胞一般都选用________代以内的细胞，这是因为________________________。重组细胞A培养过程中所用培养液除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分以及________等物质，并且用一定的方法激活其完成细胞分裂和发育进程。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有___________的物质。

（2）④所示的生物技术名称是________________________，若想得到大量健康的胰岛B细胞基因，可利用__________技术，该技术利用的工具酶是_________________。

（3）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_________________。