请回答下列有关基因工程的问题．

（1）基因工程操作的核心步骤是  _____________．若选择的限制酶切出的DNA片段是平末端，应选择___________进行连接．

（2）将目的基因导入到植物细胞采用最常用的方法是____________，该方法通常要把目的基因插入________的T﹣DNA中，这是利用T﹣DNA_______的功能．

（3）在基因工程操作中，若要在短时间内大量获取目的基因，可用_____扩增DNA，该技术的原理是____________________．

白细胞介素－2（IL－2），在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。传统生产方法成本高、产量低，获得的IL－2在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题：

（1）利用基因工程生产IL－2，过程是：

①从健康人体外周静脉血分离能合成IL－2的免疫细胞，从中提取________，经逆转录获取目的基因，此过程需要的原料是________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用DNA连接酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是________。该步骤是基因操作的核心，称为________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用Ca^2＋处理，使其成为________，再在一定温度下完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用________技术。

（2）利用蛋白质工程对IL－2进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→________→________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

（3）利用细胞工程生产IL－2，思路是：将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选出________细胞，经细胞培养可获得大量IL－2。

继乳腺生物反应器之后，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，请回答下列问题：

(1)人的生长激素基因能整合到小鼠染色体的DNA上，原因是____。

(2)将人的生长激素基因导入小鼠的受体细胞时，常选用____作为受体细胞，使用____技术。

(3)从重组细胞培养到到____个细胞的早期胚胎时可以移植，在胚胎移植前还可通过____技术获得较多胚胎。

(4)若从早期胚胎中分离出胚胎干细胞，通过体外诱导分化，培育出____，解决临床上存在的____和器官移植后免疫排斥反应问题，还可以在添加____的培养液中维持不分化状态。

（生物—选修3 现代生物科技专题）

在药品生产中，人们逐步利用基因工程技术生产出如干扰素，白细胞介素，凝血因子等各种高质量低成本的药品，请分析回答：

(1)在用目的基因与质粒形成重组DNA过程中，一般要用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶，其中限制酶切割的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿键,其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

(2)将含有“某激素基因”的质粒导入细菌细胞后，能在细菌细胞内直接合成“某激素”，则该激素在细菌体内的合成包括＿＿＿＿＿＿＿＿和                   两个阶段。

(3)基因工程形成工程菌的遗传学原理是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA是否插入了目的基因，采用技术是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，检测的原理是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________________         __________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________         ________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_______         __________________态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________________         ______，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中____________________         _____。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为                     __                 ，对于该部位，这两种酶       （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得           种大小不同的DNA片段。

基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）限制酶能识别双链DNA分子的________并切割，形成黏性末端或________；它存在于原核生物中的主要作用是________。

（2）从基因组文库获取目的基因的数目比从cDNA文库中获取的要多，原因是________。

（3）PCR技术可扩增目的基因，运用的原理是________，其参与的组分有DNA模板、4种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、分别与两条模板相结合的两种________。

（4）基因表达载体中的标记基因的作用是________。

（5）蛋白质工程之所以称为后基因工程，是因为要实现对新蛋白质的设计改造，必须要通过________或基因合成来实现。