科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。

⑴ ①过程构建的A是________________________。它必须将目的基因与_______________等调控组件重组在一起，才能通过分泌乳汁来生产人凝血因子IX医用蛋白。

⑵ 在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是________________________________________________________________。

⑶ 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生__________________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

⑷ 采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得很多转基因绵羊，这是因为___________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________。

⑸ 蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_________________________________和____________

__________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物功能进行鉴定。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1和图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入___________酶。

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________________。

(7)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_____   ___和________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(8)将重组DNA分子导入植物受体细胞的常用方法为               法。 为了确定转基因是否培育成功，要用放射性同位素标记的                         作探针进行分子杂交检测。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

阅读如下材料：

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

资料乙：T₄溶菌酶在翁度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。

回答下列问题：

（1）资料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用      法。构建基因表达载体常用的工具酶是           。在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是                                。

（2）资料乙中的技术属于   工程范畴．该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对     进行改造，或制造一种    的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的     序列发生了改变。

（3）资料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的、生理状态相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为                       体，兔乙称为                       体。

（8分）抗草胺磷(一种除草剂)转基因大豆的培育过程如图所示。

(1)用________________处理，获得上图中所示的“来自矮牵牛的抗草胺磷基因”、含有抗四环素基因的“质粒”。其中质粒上“抗四环素基因”的作用是________________________________________________________________________。

(2)图中①应为_______________________________。

(3)部分农杆菌不能在培养基(含四环素)上生长的原因是___________________________。

(4)在A→D过程中，A→B过程在恒温箱中________(填“避光”或“光照”)培养，注意观察、记录________________的生长情况。

(5)从某种蛋白质的氨基酸序列出发，利用________方法获得目的基因，通过基因工程可以生产自然界中不存在的蛋白质。下列有关基因工程中运载体的描述，正确的是________。(多选)

A．能够在宿主细胞中复制并稳定保存是运载体的必备条件之一   

B．一种运载体只能运载一种目的基因

C．使用的运载体有质粒、λ噬菌体衍生物和动植物病毒等

D．基因表达载体的构建是一样的，不因受体细胞种类、目的基因导入方法的不同而有所差异

下列关于现代生物技术应用的叙述，错误的是（ ）

抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：

（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是________________。

（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取目的基因。以此DNA为模板进行PCR扩增，还需要____________、____________、____________等。

②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用______________作限制酶。

③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：________________________。