2.
苜蓿是目前我国种植最广的豆科牧草, 但是病菌往往威胁着苜蓿的生长。为提高产量,研究人员将溶菌酶基因(LYZ基因)和绿色荧光蛋白基因(GFP基因)连接为LYZ-GFP基因,利用农杆菌转化法将其导入苜蓿细胞中,并通过组织培养成功获得了抗病植株。 图1表示Ti质粒,其中Vir区的基因产物是T-DNA转移的必备条件;图2表示含有LYZ-GFP基因的DNA片段。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。回答下列问题:
(1)构建含有LYZ-GFP基因的重组质粒时,应选用限制酶_______进行切割,原因是_____________________________________。
(2)据图分析,在培育转基因苜蓿植株过程中,应选择LYZ-GFP基因中的GFP基因为标记基因,而不选择质粒中原有的卡那霉素抗性基因为标记基因,这种做法的优点是______________________________。
(3)在组织培养过程中,对愈伤组织进行显微检测,若______________________ ,则表明细胞中GFP基因存在并表达。
(4)选择含有GFP基因的愈伤组织为材料,用PCR技术扩增并检测LYZ基因,需选用一段_________________________合成引物,该过程所用到的酶必须具有_______的特性。
(5)对该苜蓿植株进行病菌接种实验,通过观察其抗病程度可以进行个体生物学水平的鉴定,原因是 ____________________________。