2．
图1 表示含有目的基因D 的DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列,图2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp、BamHⅠ、Mbo、Sma 4 种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为
C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:
(1)图1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 脱氧核糖--_________--脱氧核糖 连接。
(2)若用限制酶Sma完全切割图1 中DNA 片段,产生的末端是 ______ _ 末端,其产物长度为__________________。
(3)若图1 中虚线方框内的碱基对被T-A 碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1 及其对应的DNA 片段,用限制酶Sma 完全切割,产物中共有_____种不同长度的DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D 通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ________________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_________ 的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D 不能正确表达,其最可能的原因是 _____________________________________________。