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            • 1.

              含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶,这两种酶对DNA分子有相同的作用序列,但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰,使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题


              (1)目前,基因工程中使用的限制酶主要是从                生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是                (填“基因组文库”,“cDNA文库”或“基因组文库”和“cDNA文库”)

              (2)含有某种限制酶的细胞,可以利用限制酶切割外源DNA,但不破坏细胞自身的DNA,其原因可能有①                ;②                

              (3)利用PCR扩增目的的基因的过程由高温变性(90~95°C),低温复性(55~60°C),适温延伸(70~75°C)三个步骤构成一个循环,为使得DNA聚合酶能够重复利用,选用的酶应在                °C处理后仍然具备催化活性。

              (4)在PCR扩增目的基因时,为实现序列中的腺嘌呤被放射性同位素标记,反应体系中添加的原料应包括碱基已被标记的                (填“腺嘌呤核糖核苷酸”,“dATP”或“ATP”).

            • 2.

              科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞,最终表达出肺结核疫苗。请回答下列问题:

              (1)为获取MPT64基因,可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA,在               的作用下合成双链cDNA片段,获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列             (填“相同”或“不同”)。

              (2)通常采用           扩增MPT64基因,前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成               ,在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是                   

              (3)根据农杆菌的特点,如果将MPT64基因插入到              上,通过农杆菌的转化作用,就可以使目的基因进入胡萝卜细胞。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达,应检测胡萝卜植株中是否含有                

              (4)研究发现,如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸,其保存时间将大大延长,科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是                   

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