⑥在DNA分子水平上进行操作

正常基因A和致病基因a中的某一特定序列经BclⅠ酶切后，产生大小不同的片段（如图1），据此可进行基因诊断。图2为某家庭该病的遗传系谱。下列叙述正确的是

下图表示“华恢l号”抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

（1）杀虫基因（crylA）是根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于______________工程技术范畴。

（2）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制酶作用位点），据图分析：

①人工改造质粒时，要使抗虫基因能成功表达，还应插入________________。

②人工改造质粒时，用限制酶Ⅰ处理，其目的是：第一，去除质粒上的____________（基因），保证T－DNA进入水稻细胞后不会促进细胞的分裂和生长；第二，使每种限制酶在质粒上只有单一作用位点，有利于__________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。

③若用限制酶Ⅱ分别切割经过②过程改造的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的情况是：在含四环素的培养基中____________，含卡那霉素的培养基中______________。

（3）“华恢l号”抗虫水稻主要培育流程④过程中，需使用的生物技术是__________。要确定杀虫基因（crylA）导入受体细胞后，是否能表达，需进行检测和鉴定，请写出在个体水平上的鉴定过程：________________________________。

用甲物种农作物的①和②两个品种以及乙物种作原材料，分别培育出四个品种的过程如下图表示。请根据图回答问题:

(1) ①和②作为亲本经过Ⅰ和Ⅱ过程培育成⑤的育种方法称为杂交育种，其中过程Ⅱ是通过__________实现的，杂交育种所依据的原理是______________。

⑵ 用③培育④的常用方法是______________。由③培育出④再培育出⑤的育种方法称为______________，其优点是____________________________。

(3)由③培育成⑥常用的方法是__________________________，形成的⑥称为______倍体。

(4)（4)将基因D导入⑤培育出⑦时，常用的运载体有______________。

多聚半乳糖醛酸酶（PG)能降解果胶使细胞壁破损，成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：

（1）  提取目的基因①若已获取PG的mRNA，可通过_____________获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有____________结合位点。

③重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是_____________________________。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有___________的培养基进行筛选，培养24~48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与________________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄培育成功。

(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用___________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。

番茄红素具有一定的抗癌效果，但在番茄红素环化酶的催化作用下，易转化为胡萝卜素。科学家利用基因工程设计了重组DNA（质粒三），并导入番茄细胞，从而阻止番茄红素的转化，提高番茄红素的产量。下图为利用质粒一和目的基因构建重组质粒三的过程示意图。请回答下列问题：

（2）先构建“质粒二”的原因主要是利用质粒二中含有                       。利用限制酶BamHⅠ开环后去磷酸化的目的是                                   ，再用Ecl酶切的目的是                                                   。

（3）质粒三导入受体细胞并表达后，形成双链RNA（发卡）的原因是                                                                。“发卡”在受体细胞内可以阻止                                            过程，从而使基因“沉默”。