绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV，蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是具有重要经济价值的双子叶植物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。

（1）理论上，基因组文库含有生物的________________基因；而cDNA文库中含有生物的________________基因。

（2）科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程表示____________。

（3）基因工程最核心的步骤是____________，④过程将重组Ti质粒导入烟草体细胞的常用方法____________。

（4）由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是____________基因，它的作用是____________。

（5）过程⑥可采取____________的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过____________的方法来确定植株是否具有抗性。

如图为四种不同的育种方法，请回答下列问题．

（1）图中A、D途径表示杂交育种，一般从F₂开始选种，这是因为_____．

（2）若亲本的基因型有以下四种类型：

①两亲本相互杂交，后代表现型为3：1的杂交组合是_____．

②选乙、丁为亲本，经A、B、C途径可培育出_____种纯合植物．该育种方法突出的优点是_____．

（3）图中通过E方法育种所运用的原理是_____．

（4）下列植物中，是通过图中F方法培育而成的植物是_____．

A．太空椒         

B．无子番茄    

C．白菜﹣甘蓝     

D．四倍体葡萄

（5）三倍体无子西瓜的培育原理是_____，无子番茄的培育原理_____。

（6）与杂交育种、诱变育种相比，基因工程育种的优点是__________．

如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答：(每空1分共10分)

(1)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?___________。为什么?_______________。 

(2)过程②必需的酶是_____________酶。

(3)在利用A、B获得C的过程中，一般用______________切割A和B，使它们产生___________，再加入________________，才可形成C。

(4)由此可知，基因工程操作一般要经过A的获取、________(填字母)和________(填字母)的结合、_________(填字母)导入D、目的基因在大肠杆菌中表达与检测四个步骤。

下图表示“华恢l号”抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

（1）杀虫基因（crylA）是根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于______________工程技术范畴。

（2）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制酶作用位点），据图分析：

①人工改造质粒时，要使抗虫基因能成功表达，还应插入________________。

②人工改造质粒时，用限制酶Ⅰ处理，其目的是：第一，去除质粒上的____________（基因），保证T－DNA进入水稻细胞后不会促进细胞的分裂和生长；第二，使每种限制酶在质粒上只有单一作用位点，有利于__________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。

③若用限制酶Ⅱ分别切割经过②过程改造的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的情况是：在含四环素的培养基中____________，含卡那霉素的培养基中______________。

（3）“华恢l号”抗虫水稻主要培育流程④过程中，需使用的生物技术是__________。要确定杀虫基因（crylA）导入受体细胞后，是否能表达，需进行检测和鉴定，请写出在个体水平上的鉴定过程：________________________________。

用甲物种农作物的①和②两个品种以及乙物种作原材料，分别培育出四个品种的过程如下图表示。请根据图回答问题:

(1) ①和②作为亲本经过Ⅰ和Ⅱ过程培育成⑤的育种方法称为杂交育种，其中过程Ⅱ是通过__________实现的，杂交育种所依据的原理是______________。

⑵ 用③培育④的常用方法是______________。由③培育出④再培育出⑤的育种方法称为______________，其优点是____________________________。

(3)由③培育成⑥常用的方法是__________________________，形成的⑥称为______倍体。

(4)（4)将基因D导入⑤培育出⑦时，常用的运载体有______________。

多聚半乳糖醛酸酶（PG)能降解果胶使细胞壁破损，成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：

（1）  提取目的基因①若已获取PG的mRNA，可通过_____________获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有____________结合位点。

③重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是_____________________________。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有___________的培养基进行筛选，培养24~48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与________________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄培育成功。

(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用___________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。

番茄红素具有一定的抗癌效果，但在番茄红素环化酶的催化作用下，易转化为胡萝卜素。科学家利用基因工程设计了重组DNA（质粒三），并导入番茄细胞，从而阻止番茄红素的转化，提高番茄红素的产量。下图为利用质粒一和目的基因构建重组质粒三的过程示意图。请回答下列问题：

（2）先构建“质粒二”的原因主要是利用质粒二中含有                       。利用限制酶BamHⅠ开环后去磷酸化的目的是                                   ，再用Ecl酶切的目的是                                                   。

（3）质粒三导入受体细胞并表达后，形成双链RNA（发卡）的原因是                                                                。“发卡”在受体细胞内可以阻止                                            过程，从而使基因“沉默”。

下图为某种转基因抗病棉花培育过程图，请据图回答下列问题：

（1）PCR技术利用的基本原理是____________________。利用该技术扩增目标DNA片段（子链的延伸方向从5′→3′），应选择图中的引物___________（填字母）与模板DNA结合。

（2）在构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，获得不同的黏性末端，其主要目的是________________________。

（3）将重组质粒导入植物细胞中常用的方法是___________。我国科学家将重组质粒导入棉花受体细胞所用的方法是______________________。

（4）重组细胞经过G、H过程成功地培育出了转基因抗病毒马铃薯植株，此过程涉及植物组织培养技术，该技术广泛应用于_______________________等育种过程（至少写出两种）。

（5）研究表明，转基因植物可以通过花粉将外源基因扩散到其他植物，从而对生态环境造成潜在的危害。因此，科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中，这样做的目的是_________________。

科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株一抗虫棉。其过程大致如图所示：

(1)基因工程的核心是_________    ____________________。

(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T-DNA，把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA的________________________________特点。

(3)Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为_________________ 。

(4)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是______________  ___ 。

(5)目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是________________________    ____，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是_________________。