回答下列（一）、（二）小题：

(一)转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

（1）若要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会________________________。要获得含抗病基因的重组质粒可用___________和_____限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有_________________基因，作为标记基因。

（3）将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是_______________法。

（4）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________的方法，可培育成能表现新性状的植株，该方法依据的原理是：_______________________________。

(二)图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

（1）②过程常用的方法是___________________。

③过程若要检验是否产生了人的生长素可用______________技术。

（2）转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有_________________。

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是_______细胞，Ⅲ代表的细胞具有_______的特点。

（4）在抗虫棉培育过程中，④过程中采用最多的方法是____________________，⑤过程采用的技术是___________________。

阅读下列资料，回答相关问题：

资料1:用小鼠制备的抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕试剂盒”，检测早孕的准确率在90%以上。

资料2:葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸为目标氨基酸后，用有效方法以脯氨酸替代甘氨酸，结果其最适反应温度提高了10—12℃，使蛋白质空间结构更具刚性。

资料3:目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品，大致过程如图所示：

资料4：十九大提出“既要金山银山，又要绿水蓝天”，要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行恢复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要。

（1）资料1中，在该“单抗”的生产过程中，将人绒毛膜促性腺激素作为抗原对小鼠进行接种后，从脾脏中提取B淋巴细胞，并设法将其与鼠的骨髓瘤细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选，选出融合的杂种细胞，对该细胞还需进行__________培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的符合需要的杂交瘤细胞。单克隆抗体最主要的优点是________________________________。

（2）资料2中提到的生物技术属于_________工程的范畴。在该实例中，直接需要操作的是_____(选填“肽链结构”、“蛋白质空间结构"、"基因结构")。

（3）资料3中哺乳动物的体外受精主要包括[a]__________________、[b]________________和受精等几个主要步骤。

（4）资料4主要遵循了生态工程的___________原理。

[生物—选修3现代生物科技专题]

下图是利用单克隆抗体技术制备三聚氰胺特异性抗体的过程，请据图回答：

（1）单克隆抗体的制备过程中要用到                               技术。

（2）由于三聚氰胺分子量过小，不足以激活高等动物的免疫系统，因此在制备抗体前必须对其进行①过程，下列哪物质不适合作“扩容”抗原分子的是（   ）

A．蛋白质     B．多糖     C．磷脂     D．核苷酸

（3）③过程动物细胞特有的促融方法是用灭活的病毒，④过程用特定的选择性培养基筛选，会使                                      的细胞死亡；选出的杂交瘤细胞还需进行

                和抗体检测，才能获得产三聚氰胺抗体的杂交瘤细胞株。

（4）制备的三聚氰胺单克隆抗体可用于检测乳制品中存在的微量三聚氰胺，说明三聚氰胺单克隆抗体具有                              特征。

下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合前可用纤维素酶除去细胞壁得到            。

（2）不同种植物之间由于存在          而不能进行有性杂交，但植物体细胞杂交技术的成功为培育种间或属间杂种植株提供了新的思路。

（3）动物细胞工程的重要目的之一是制备单克隆抗体。若A细胞为瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，则促融后能形成         种融合细胞（只考虑细胞

两两融合），还应从中筛选出既能          又能产生             的杂交瘤细胞。与传统从血清提取的抗体相比，单克隆抗体的优点是            

（4）制备单克隆抗体的过程中涉及到的细胞工程技术有                                                   。

1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

动物细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。现在已经广泛应用于多种学科的研究：[作中，特别是新发展起来的杂交瘤技术，为制备单克隆抗体开辟了新途径。研究表明DNA合成有两条途径：“S途径”和“D途径”，淋巴细胞(效应B细胞)有“S途径”和“D途径”；骨髓瘤细胞只有“D途径”；HAT培养液中氨基喋呤可以阻断DNA合成的“D途径”。下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。回答下列问题：

(1)________技术是单克隆抗体技术的基础。

(2)单克隆细胞是指________。

(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________。

(4)杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的________特点，又具备淋巴细胞的________特点。

(5)图示过程，有两次的筛选。第一次是用HAT培养液筛选出杂交瘤细胞，那么淋巴细胞(效应B细胞)在HAT培养液中不生长的是________，骨髓瘤细胞在HAT培养液中不生长的原因是________。

下面为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图，据图回答下列问题：

(1)图中向小鼠注射包含多种抗原决定簇的抗原后，所获得的免疫抗血清实际上是含有________________(填写抗体的名称)的混合物，这种方法制备的多克隆抗体不仅产量低，而且纯度低。与多克隆抗体相比，单克隆抗体突出的优点在于它的__________________，并能大量制备。

(2)图中选用B细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞膜具有________；如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有________种类型。

(3)图中两次筛选的目的不同，其中筛选①的目的是筛选出________，筛选②的目的是筛选出______________________。筛选时所用的培养基是特定的________培养基。

(4)科学工作者正在研究的用于治疗癌症的“生物导弹”就是________________。用“生物导弹”治疗癌症的方法优于化疗的原因是___________。

(5)由图中可看出，单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的______________和____________两大技术。

类风湿性关节炎（RA）是一种自身免疫病，致残性强。研究表明，该病的病理改变与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）密切相关，而一种人鼠嵌合的抗TNF-α单克隆抗体能有效治疗RA。下图为该单克隆抗体制备过程示意图。

（1）单克隆抗体的制备涉及细胞工程中的                           技术。

（2）图中的抗原A是            ，促融剂常用                 ，HAT培养基的作用是                                。

（3）医疗上，把单克隆抗体与化学药物或细胞毒素相结合制成“           ”，借助抗体的定向作用将药物带到病变细胞并将其杀死。

（4）克隆动物是指用            方法得到的动物；为提高胚胎的利用率，可用           技术获得同卵双胎或多胎。

（5）在克隆技术伦理方面，我国政府的态度是禁止生殖性克隆人，不反对         克隆。

（1）与酵母菌相比较，蓝细菌在结构上最主要的特点是没有成型的__________，在代谢上最主要的特点是能进行__________作用。

（2）①②过程中均使用的工具酶有__________和__________。

（3）构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是__________和__________。

Ⅱ．人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请回答下列问题。

（4）制备单克隆抗体过程中要用到__________技术和__________技术。

（5）在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。

①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的__________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。

②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是__________。

（6）此过程生产的单克隆抗体可以与__________特异性结合，从而诊断早孕。