制备杂交瘤细胞时，取免疫后小鼠的B淋巴细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，由于细胞融合是随机的，且融合率达不到100%。结果得到的融合体系中除含有杂交瘤细胞外，还有B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞、未融合的B淋巴细胞和未融合的骨髓瘤细胞。

   细胸内DNA合成一般有两条途径：D途径和S途径。B淋巴细胞同时具有两条途径合DNA，骨髓瘤细胞S途径缺失。

（1）人们创建杂交瘤技术是为了获得具有疾病的诊断、预防、治疗价值的单克隆抗体，单克隆抗体最主要的做点是________。

（2）如果用可以阻断细胞内DNA合成D途径的培养基进行筛选，在上述融合体系的细胞中，未融合的骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胸是不能增殖的，其原因是________；但是短期内________（填细胞名称）可以增殖；若利用上述培养基，对存活细胸经多次传代培养，最终只得到杂交瘤细胞，其余细胞不能存活的原因是________。

（3）为了进一步得到所需的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和________。

（4）杂交瘤技术中的细胞融合和抗体分泌都离不开细胞膜，这体现了细胞膜具有________的特点。

白细胞介素－2（IL－2），在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。传统生产方法成本高、产量低，获得的IL－2在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题：

（1）利用基因工程生产IL－2，过程是：

①从健康人体外周静脉血分离能合成IL－2的免疫细胞，从中提取________，经逆转录获取目的基因，此过程需要的原料是________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用DNA连接酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是________。该步骤是基因操作的核心，称为________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用Ca^2＋处理，使其成为________，再在一定温度下完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用________技术。

（2）利用蛋白质工程对IL－2进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→________→________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

（3）利用细胞工程生产IL－2，思路是：将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选出________细胞，经细胞培养可获得大量IL－2。

（1）图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是________。

（2）图甲中②过程常在________促融剂诱导下完成，③过程中至少涉及两次筛选；第一次利用________进行初步筛选，第二次利用________的方法筛选出既能大量增殖，又能产生单一性抗体的杂交瘤细胞。④过程与体外培养相比，其优点是________。

（3）单克隆抗体结合上抗癌药物能定向攻击癌细胞，这一应用可形象地称为________。

（4）图乙过程的技术具有多种用途，但是不能________。

A．有选择地繁殖某一性别的家畜        B．繁殖家畜中的优良个体

C．用于保存物种                      D．改变动物的核基因

（5）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是________。

A．卵细胞大，便于操作                            B．卵细胞含有的营养物质多

C．卵细胞细胞质可使体细胞核全能性得到表达        D．重组细胞才具有全能性

[生物－选修3：现代生物科技专题]

目前单克隆抗体的应用受到越来越多的重视，如作为诊断试剂、制成生物导弹等。请根据所学知识，回答下列问题：

（1）制备单克隆抗体涉及到的生物技术有________和________。

（2）为获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞需要多次筛选，其中第一次筛选用________培养基。经初次筛选的杂交瘤细胞，还需进行________和________（操作）。

（3）杂交瘤细胞可在体外条件下做大规模培养或注射小鼠腹腔内，这样可从________或________中提取大量的单克隆抗体。

（4）单克隆抗体与常规的血清抗体相比优点是________。

科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了新思路。某国家重点实验室准备探索利用基因工程生产单克隆抗体，请回答下列问题：

（1）实验室已获得无限增殖调控基因（prG）。在体外，可采用________技术大量扩增该目的基因。该技术的基本反应过程：目的基因DNA受热________后解链为单链，________与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶的作用下进行________，如此重复循环多次。该技术的前提是要有________，以便根据这一序列合成引物。

（2）该基因工程操作的核心是________。本研究中，受体细胞为________，欲将目的基因转入受体细胞，常采用________方法。若实验成功，则受体细胞既能________，又能________。

（3）制备单克隆抗体通常选用细胞融合技术，使________细胞与________细胞融合，融合成功的细胞经过筛选就是所需要的________细胞。

［生物——选修3：现代生物科技专题］据生物科技相关知识回答：

⑴培育抗虫棉的目的基因来自             （填一细菌名称），构建的目的基因表达载体首先要导入的受体菌是             。

⑵动物胚胎移植中，胚胎能在受体子宫内存活的生理基础是                        ；若要实现胚胎分割，一般选用             期的胚胎。

⑶动物细胞培养不能形成动物个体的原因是细胞未经过       过程，而植物组织培养中，无论用体细胞还是花药做外植体，都能形成完整植株，这是因为这些植物细胞都具有             。

⑶将选择培养的杂交瘤细胞再进行克隆化培养和抗体检测的目的是                。

【生物—选修3：现代生物科技专题】

某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示：

若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目为40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目为60）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导剂融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。

回答下列问题：

（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过_____次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_____小鼠，理由是_____。

（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_____，体系中出现多种类型细胞的原因是_____。

（3）杂交瘤细胞中有_____个细胞核，染色体数目最多是_____条。

（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_____。

科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景．请回答下列问题：

（1）利用　　　　　　技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、　　　　　、电激等诱导因素诱导细胞融合，再经多次筛选和培养获得足够数量的能分泌所需抗体的　　　　　细胞．

（2）有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：

①取特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的能够　　　　　　的细胞中，构成重组细胞．（假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响）

②将重组细胞在　　　　　　条件下做大规模培养或注射到小鼠　　　　　　内增殖，以获得大量单克隆抗体．

“检测”或“筛选”在很多生物工程技术都要用到。请回答以下问题：

(1)基因工程中，完整的基因表达载体内________基因常用于“筛选”。培育抗虫棉时，检测所得植株染色体的DNA上插入的目的基因是否表达可采用的方法是________，从个体水平检测所得植株是否具有抗虫特性，需要做________。

(2)在进行番茄与土豆的体细胞杂交时，植物细胞原生质体融合后要进行筛选，目的是要获得________进行组织培养。

(3)单克隆抗体制备过程中，首先要用________对融合的细胞进行筛选，之后还需进行克隆化培养和________检测，最终选择出的细胞是________。

(4)在牛的胚胎移植时，首先要对________进行选择和处理，而适合胚胎移植的胚胎是________，移植后要对受体进行是否________的检查。

应用生物工程技术可获得人们需要的生物新品种或新产品。请回答下列问题：

（1）在培育转人生长素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是______________，②过程常用的方法是__________________。

（2）转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有_____________。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用胚胎分割和______________技术，培育出多头相同的转基因犊牛。

（3）prG无限增殖基因能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是___________细胞，III代表的细胞具有_____________的特点。

（4）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是______________，⑤过程采用的技术是__________________。