请利用所学知识．回答下列有关月季的花药培养问题：

（1）诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低的主要影响因素是_____  和_____．

（2）为了选择适宜发育期的花药．通常选择_____的花蕾．将该时期的花药放在载玻片上．加一滴质量分数为1%的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，再放在显微镜下观察，若发现大多数花粉粒内只有一个深色“点”．这种状态的花药是否适合培养？_____．

（3）进行组织培养需配制MS培养基．欲利于根的分化．植物激素的用量比例应为_____．

（4）如图为花药培养产生花粉植株的两种途径，请填出图中A，B及①的名称．（A，B指发育阶段，①、②、③指发育过程，其中②是再分化、③是分化）．

A_____、B_____；①_____．

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是______________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，用该双链cDNA进行PCR扩增，进行了30个循环后，理论上可以产生约为__________个DNA分子，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________，获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列___________（填“相同”或“不同”）。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建_______________,构建好的重组质粒在其目的基因前端要加上特殊的启动子，启动子是___________识别结合的位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取_______________技术。目的基因导入组织细胞后，通过________技术培育出青蒿幼苗。

[生物——选修1：生物技术实践]

Ⅰ．菊花的组织培养的大致过程如下图所示，请回答下列问题：

菊花植物体 → 未开花的幼嫩枝条 → 愈伤组织  → 试管幼苗 

    （1）该实验操作成功的关键是             ，所以要对外植体、超净工作台等消毒，对

培养基等灭菌，实验操作过程都要在        旁进行。外植体的消毒所需酒精的体积分数是       。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是                   。

    （2）培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值       （填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。试管幼苗的获得证明菊花体细胞具有            性。

Ⅱ．（1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有                   的性质。蒸馏时收集的蒸馏液       (是、不是)纯的玫瑰精油，原因是           

                             。

    （2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和          。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是  

                                                               。

    （3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会          ，原因是            

                             。

β-葡萄糖甘酸酶（GUS）基因来自大肠杆菌。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的缓冲液中，GUS能与底物发生反应，使植物组织呈现蓝色。研究人员利用转GUS基因的葡萄植株，以探究干旱调节对葡萄P启动子的功能是否有诱导作用。请回答：

（1）葡萄P启动子是____________识别并结合的位点。欲获得葡萄P启动子，可根据P启动子的核苷酸序列设计引物，利用该引物和从葡萄细胞获取的_________________为模板进行PCR扩增。

（2）将葡萄P启动子与GUS基因等元件构建基因表达载体，利用___________(方法)将该基因表达载体导入葡萄愈伤组织，葡萄愈伤组织在培养基中经______________后，进而发育形成转基因葡萄植株。

（3）取上述转基因葡萄植株分为A、B两组，A组置于正常条件（无干旱处理）下培养，B组置于干旱条件下培养。一段时间后分别取A、B组葡萄植株幼根，浸泡在含有底物的缓冲液中，观察幼根颜色变化情况。

①若A、B组的结果分别为____________________，则葡萄P启动子的功能受干旱诱导。

②若A、B组的结果分别为____________________，则葡萄P启动子的功能不受干旱诱导。

下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）基因表达载体的构建需要用限制酶___________            切割目的基因和载体，该类酶作用于DNA的______________       。

（2）Ti质粒是农杆菌体内一种质粒，其上有T—DNA，把目的基因插入Ti质粒的T—DNA中是利用T—DNA的____________________________     特点。

（3）抗冻蛋白基因转入番茄细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为__________。可以在培养基中添加_________      ，便于筛选出含抗冻蛋白基因的番茄细胞。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___________________ 过程。

如图所示为植株繁殖的四种人工方式示意图，请据图回答：

​

(1)图中单倍体植株通常的获取方式是________________。若图中单倍体细胞含2个染色体组，A有4个染色体组，则③过程所用化学试剂的作用是_________。

(2)图中B和C过程的不同点是______________________________________，

这种不同主要的决定因素是________________________________________。

(3)若想在C过程中获得突变体，进而培育成新品种植株，应用物理诱变或化学诱变的方法处理____________。

(4)若要获得水稻的人工种子，则应选用图中的________结构，该结构与正常受精卵形成的________有类似的结构和发育过程。

(5)若D为胡萝卜—羊角芹，②过程经融合处理后，已经融合的细胞类型有________种(若融合的细胞只考虑两两融合)。

（生物—选修3 现代生物科技专题）

紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的一种代谢产物，具有显著的抗癌效果。下面是几种生物合成紫杉醇的方法，请据图回答相关问题：

（1）若利用微型繁殖技术大量生产红豆杉幼苗，则该技术利用的原理是___________。在植物组织培养的培养基中除无机营养成分、有机营养成分、琼脂外，还需要添加__________。红豆杉的形成层在生长发育过程中并不能合成紫杉醇的根本原因是_________________。

（2）科学家尝试利用PCR技术从太平洋红豆杉中获取相关基因片段，并在大肠杆菌中完成转化过程。PCR技术利用的原理是___________。将该目的基因导入受体菌时，常利用Ca²⁺处理细胞，使其成为___________，从而完成转化过程。若重组大肠杆菌产生的中间代谢产物扩散到水体或土壤后，可引发_________安全问题。

（3）为了培养能产生紫杉醇的红豆杉-柴胡植株，科研人员将红豆杉的愈伤组织和柴胡的愈伤组织用纤维素酶和果胶酶处理后，获得有活力的____________，再用诱导剂____________使其融合，最后选择能够高效合成紫杉醇的杂交细胞进行培养。

 (1)过程②取出的根韧皮部细胞能否进行细胞分裂?        为什么?        ____                   _。

 (2)过程③称为          ，由单个细胞形成细胞团需经过     分裂（方式）。

 (3)过程④由细胞团形成胚状体要经过          过程，其结果是                  。

 (4)该实验的成功证明了                                          。

（8分）抗草胺磷(一种除草剂)转基因大豆的培育过程如图所示。

(1)用________________处理，获得上图中所示的“来自矮牵牛的抗草胺磷基因”、含有抗四环素基因的“质粒”。其中质粒上“抗四环素基因”的作用是________________________________________________________________________。

(2)图中①应为_______________________________。

(3)部分农杆菌不能在培养基(含四环素)上生长的原因是___________________________。

(4)在A→D过程中，A→B过程在恒温箱中________(填“避光”或“光照”)培养，注意观察、记录________________的生长情况。

(5)从某种蛋白质的氨基酸序列出发，利用________方法获得目的基因，通过基因工程可以生产自然界中不存在的蛋白质。下列有关基因工程中运载体的描述，正确的是________。(多选)

A．能够在宿主细胞中复制并稳定保存是运载体的必备条件之一   

B．一种运载体只能运载一种目的基因

C．使用的运载体有质粒、λ噬菌体衍生物和动植物病毒等

D．基因表达载体的构建是一样的，不因受体细胞种类、目的基因导入方法的不同而有所差异

（6分）绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。

(1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程表示________。

(2)由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是________________基因，重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是________________。

(3)在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外，还必须添加________，以保证受体细胞能培养成再生植株。

(4)过程⑥可采取________________的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过________________的方法来确定植株是否具有抗性。