【生物—选修3：现代生物科技专题】

某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示：

若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目为40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目为60）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导剂融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。

回答下列问题：

（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过_____次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_____小鼠，理由是_____。

（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_____，体系中出现多种类型细胞的原因是_____。

（3）杂交瘤细胞中有_____个细胞核，染色体数目最多是_____条。

（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_____。

【生物——选修三】

类风湿性关节炎（RA）是一种自身免疫病，致残性强。研究表明，该病的病理改变与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）密切相关，而一种人鼠嵌合的抗TNF-α单克隆抗体能有效治疗RA。下图为该单克隆抗体制备过程示意图。

（1）单克隆抗体的制备涉及细胞工程中的                           技术。

（2）图中的抗原A是            ，促融剂常用                 ，HAT培养基的作用是                                。

（3）医疗上，把单克隆抗体与化学药物或细胞毒素相结合制成“           ”，借助抗体的定向作用将药物带到病变细胞并将其杀死。

（4）克隆动物是指用            方法得到的动物；为提高胚胎的利用率，可用           技术获得同卵双胎或多胎。

（5）在克隆技术伦理方面，我国政府的态度是禁止生殖性克隆人，不反对 

       克隆。

研究表明,某种原癌基因表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长,目前已成为乳腺癌有效的生物治疗手段。如图为抗H蛋白单克隆抗体的制备及相关操作过程,请回答问题:

(1)将H蛋白注射到小鼠体内,取该小鼠的脾脏细胞与甲培养皿中骨髓瘤细胞进行融合,则乙培养皿中融合细胞类型有　　 　　种,其融合的原理是　　　　　　　　。其中将H蛋白注射到小鼠体内时,在小鼠体内发生了　　　 　免疫过程。

(2)图中③过程,将融合细胞置于　　　 　培养基中培养,一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到丙(多孔培养板)上培养,吸取生长有克隆细胞的培养孔中的上清液,应用　　　 　技术进行抗体阳性检测。经多次筛选,就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。

(3)治疗乳腺癌时,可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”,杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体　　 　　　　　　　的特点。筛选得到的杂交瘤细胞,经过②过程(小鼠腹腔内培养)或④过程(体外培养)可以获取大量的单克隆抗体,由上述过程产生的单克隆抗体不能直接用于人体,理由是　　　　　　　　　　　　。

(4)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因,该基因能激发动物细胞分裂,这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体的技术外,请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路:　　　　　　　。

科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景．请回答下列问题：

（1）利用　　　　　　技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、　　　　　、电激等诱导因素诱导细胞融合，再经多次筛选和培养获得足够数量的能分泌所需抗体的　　　　　细胞．

（2）有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：

①取特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的能够　　　　　　的细胞中，构成重组细胞．（假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响）

②将重组细胞在　　　　　　条件下做大规模培养或注射到小鼠　　　　　　内增殖，以获得大量单克隆抗体．

迄今为止，人们用单克隆抗体已找到不少人和动物的精子抗原。由于精子必须经过获能才具有受精能力，故利用单克隆抗体研究精子获能前后细胞内和细胞表面大分子的变化，可探索新的避孕方法和男性不育诊断及治疗的新途径。请回答下列问题：

(1)制备抗精子的单克隆抗体过程中，首先要向小鼠注射获能后的精子悬液，其目的是为了获得相应的________，用化学方法将该细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合时用________作为促融剂。

(2)对杂种细胞一般要进行两次筛选，第一次筛选是用________进行筛选，第二次筛选的方法为专一抗体检测阳性和克隆化培养。将最终获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中能获得大量的单克隆抗体，在小鼠腹腔中进行细胞培养的优点是________.

(3)自然条件下精子与卵细胞结合的场所是________，精子获能前后表面的物质会发生变化，从根本上分析是________的结果。在受精作用中防止多精入卵的两条途径是________。

(1)在单克隆抗体CPV McAb的制备过程中，所用到的细胞工程技术有________和________。

(2)诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合最常用的方法是________；对杂交细胞进行培养时，需要________的环境，及营养、温度、pH和________的气体环境适宜的条件。

(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别CPV，其原因是该抗体具有________的特点。

（1）培育抗虫棉时，检测所得植株染色体的DNA上是否插入了目的基因的方法是_________，从个体水平检测所得植株是否具有抗虫特性，需要做_________。

（2）植物细胞原生质体融合后要进行筛选，目的是要获得_________进行组织培养。体细胞诱变育种过程中，可以对愈伤组织进行一定处理后，从中筛选_________，以培育新品种。

（3）单克隆抗体制备过程中，首先要用_________对融合的细胞进行筛选，之后还需进行克隆化培养和抗体检测，最终选择出的细胞具有_________的特点。

（4）在胚胎移植时，首先要对_________进行选择和处理，胚胎移植后，要对受体进行是否_________的检查。