下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                  等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有      、          个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取       作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要        个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发       色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

I.[生物一选修1:生物技术实践]

酵母菌是生物科学研穷中一种重要的生物材料，请回答：

（1）酵母菌的新陈代谢类型是__________，其细胞内将葡萄糖分解为酒精的酶存在于__________。

（2）某同学尝试用新鲜葡萄制作葡萄酒、为验证发酵液中含有酒精，取2mL发酵液加入试管中，滴加O.5mL浓硫酸酸化的重铬酸钾溶液并轻轻震荡，观察到溶液变__________色，则证明发酵液中含酒精。

（3）研究者利用基因工程技术改造酵母菌，得到如下四种变异菌株：①菌株Ⅰ——不能合成纤维素酶，菌株Ⅱ——合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，菌株Ⅲ——合成的纤维素酶能分泌到细胞外，菌株Ⅳ——合成的纤维素酶分泌并固定于细胞壁。

在以纤维素为唯一碳源的培莽基上能生长繁殖形成菌落的是菌株_______，若在培养基中加入_______，则菌落周围会出现透明圈。在利用纤维素生产酒精时，与菌株Ⅲ相比，菌株Ⅳ的纤维素酶的利用率高，因为______________________________________________________________。

（4）为研究发酵罐中酿酒酵母菌的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH值。若某研究人员将样品的次序搞乱了，那么判断取样顺序的主要依据基__________（填“酵母菌的数量”或“发酵液的pH”）。

II.[生物一选修3:现代生物科技专题]

内皮抑素是一种效果良好的新型抗癌药物，由胶原XⅤⅢ（广泛存在于肝脏等组织中）降解产生。我国科学家研制成含转入内皮抑素基因双歧杆菌的口服液，口服后，双歧杆菌在肠道定植、繁殖，双歧杆菌死亡裂解后，其产生的内皮抑素活性片段被吞噬、转运到肿瘤组织发挥作用。回答下列问题：

（1）要利用逆转录的方法合成人内皮抑素基因，应从__________组织细胞中提取mRNA，与细胞中内皮抑素基因相比，这种方法合成的cDNA没有__________、启动子、终止子等。

（2）根据内皮抑素基因的脱氧核苷酸序列设计并合成引物，利用__________技术得到大量内皮抑素基因。

（3）临床上也有通过静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，使肿瘤生长受到抑制。在进入临床使用前需要进行目的基因的检测与鉴定：用胰蛋白酶将血管内皮组织___________，制成细胞悬液→转入

含_____________________等天然成分的培养液中培养得到大量血管内皮细胞→用重组腺病毒感染血管内皮细胞，若抗原—抗体杂交检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明_________________。

（4）口服含转入内皮抑素基因双歧杆菌口服液、静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，两种方法都能使肿瘤生长受到抑制，其中属于体内基因治疗的是__________（填“第一种”或“第二种”）。

回答下列有关动物细胞培养的问题：

(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的__________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是________________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是____________。

(2)在细胞培养过程中，通常在__________条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中___________的活性降低，细胞________________的速率降低。

(3)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作__________进行攻击。

(4)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不被染色，原因是___________________________________________。

丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性菲醌化合物，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。以下是相关的实验研究过程及结果：

实验材料：人肝癌细胞(HepG2)，培养液，0.02%二甲亚砜溶液，用0.02%二甲亚砜溶解的0.5ug/mL、1ug/mL、1.5ug/mL的丹参酮溶液，培养瓶等。

①将等量的人肝癌细胞(HepG2)悬液，分别接种于若干含有等量培养液的培养瓶中；将培养瓶放于37℃、5%CO₂培养箱中培养24 h，静置、去掉上清液；

②________________________________________________________________________，

再加入等量的培养液，于37℃、5%CO₂培养箱中继续培养；

③培养72h，每24h用细胞计数仪检测癌细胞数。

(1)请完善上述实验步骤中相关内容。

(2)本实验的自变量是________________。实验验中，每组细胞培养瓶不止一个，统计后代求平均值，目的是________________。

(3)设对照组癌细胞增殖率为100%，用下面公式计算各用药组癌细胞增殖率：增殖率(%)＝[(用药组各时段癌细胞数－用药组开始癌细胞数)/(对照组各时段癌细胞数－对照组开始癌细胞数)]×100，得到以下数据：

表1 丹参酮对HepG2细胞增殖率的影响/%

通过数据分析可以得出丹参酮对HepG2细胞的作用效果的特点是：___________________________________________________________________。

(4)顺铂(DDP)是一种DNA损伤药物，也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物。若要探究丹参酮联合顺铂对HepG2细胞生长的影响，应还需设置____________________________用药组才能得出结论。