利用下列细胞工程技术培养出的新个体中，只具有一个亲本遗传性状的是

①植物组织培养②植物体细胞杂交

③动物胚胎移植④动物核移植技术．

下列有关动物细胞工程及胚胎工程的叙述,错误的是

目前我国的第三代试管婴儿技术已获得突破，不但能解决部分不孕不育问题，还能在胚胎移植前对部分遗传性疾病进行筛查，从而实现优生优育。请回答下列问题：

（1）第三代试管婴儿利用了下列________（填字母）手段。

A．体外受精技术

B．胚胎移植技术

C．植入前胚胎遗传学诊断技术

D．克隆技术

（2）胚胎发育的卵裂期在________（填“透明带”或“放射冠”）内进行。受精卵经72小时体外培养发育成有32个细胞左右的________胚，可用于胚胎移植。要得到“同卵双胞胎”，理论上需要采用________技术。

（3）为了避免某些遗传病的发生，需对胚胎的性别进行鉴定。目前最准确的方法是从被测的囊胚中取出几个________（填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段碱基作________，以________为模板进行PCR扩增；最后与SRY特异性探针出现阳性反应者，胚胎为________性。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是                         。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有                 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的                       。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取                   作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，能否使用SmaI,并说明原因是                                        。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答相关问题：

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射________。体内受精一段时间后，可通过________操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到____  ____的卵母细胞。

(2)在途径②中，以成熟体细胞为供体进行核移植成功率很低，而以胚胎细胞为供体成功率会显著提高，原因是________。在途径③中，将目的基因导入受精卵常用的方法是________；若用DNA分子杂交技术检测导入是否成功，需以____    ____为模板制作探针。

(3)优良胚胎移植前需培养到____  ____时期，且受体母牛需处于_______  _状态。

下面是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图同答:

（1）分析可知，科学家获取绿色荧光蛋白基因所运用的限制酶是图中所示的________，最终获得的绿色荧光蛋白基因的末端类型属于_________________。

(2)图示工程中，将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程③称为_________，常用的方法是_______________。

(3)图示中，作为受体细胞的去核卵母细胞一般处在_______________期，常通过______(物理方法)进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。

(4)培养图示重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为____________培养基。通常在培养基中还需要加入适量的___________等天然成分通入氧气主要作用是____________________________。

请回答下列有关胚胎工程和基因工程等方面的问题：

（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞讲行核移植的原因是                               。在哺乳动物的核移植实验中,一般通过             (物理方法)将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，将胚胎植入同种的、生理状态相同的另一雌性（代孕）动物体内。为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用         技术。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理。该处理有                             两种方法。另外，培养的卵母细胞需要发育至                   ，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。

（3）在基因工程中若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，则所构建的基因表达载体必须包括:某种牛乳腺分泌蛋白基因的启动子、               、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的      (填“受精卵”或“乳腺细胞”）。若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用               技术。

(1)图中①、②所示的结构分别是___________、________________，④过程常用的方法是___________。

(2)图中③、⑤所示的生物工程技术分别是             、            ，利用___________技术快速扩增健康胰岛B细胞基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在          酶的作用下延伸形成DNA，该技术的原理是__________________。

(3)过程④通常用②做受体细胞的原因是____________________________________。

(4)图示治病的方法叫做______________，与一般的异体移植相比最大的优点是 ______________________。

下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有       个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和       等。

（3）下图所示的一个质粒分子经 EcoRⅠ切割前后，分别含有        个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取        作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第 n次时，需要       个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发      色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用      的技术。