下列属于克隆的是( )

①将表达载体在受体细胞中进行扩增

②由一个细胞经过有丝分裂形成细胞群

③运用体细胞核移植技术和胚胎分割技术产生的动物

④由一个细菌分裂出多个和它完全一样的细菌而形成菌落

【选修3-现代生物科技专题】

为治疗糖尿病，研究人员提出了如下图的方法。

（1）一般选用的图中①都是_____________的供体细胞。

（2）核移植的受体细胞一般选用MⅡ期卵母细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出_____________。  

（3）细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度、pH和气体环境外，还需要有_____。上图所获的胚胎干细胞可由________中分离出来，在功能上具有________。

（4）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是___________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞并维持稳定和表达的过程，称为_____。

（5）“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生_________，从而形成功能专一的胰岛类似细胞。

（6）该治疗糖尿病的方法与相比异体移植，突出的优点是________。

（1）方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技术有______________和______________。

（2）用激素处理的目的是使B牛______________，从B牛体内获得的卵母细胞需要培养到____________________(时期)才能与精子结合。

（3）A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵细胞结合，完成受精作用，这个过程叫______________。卵子受精的标志是在卵黄膜和透明带的间隙能够观察到______________。

（4）生产上常用______________期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用______________技术。

根据国际糖尿病联盟报告，在最近的10年中，全世界糖尿病的发生率呈逐年增长的趋势。糖尿病是由多种因素引起的代谢紊乱疾病，已成为继肿瘤、心脑血管疾病之后威胁人类健康和生命安全的第三位重大疾病。

(1)核移植的受体细胞一般选用_____细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和_____。

(2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入_____。此外，还应定期_____，以便清除代谢废物。

(3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是_____。

(4)定向诱导的本质是使重组细胞发生_____________。

科学技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配不正确的是( )

下图表示选用具有同一外源目的基因对某品种奶牛进行遗传特性改造的三种途径，下列有关叙述正确的是( )

利用细胞工程技术培养出的新个体中，只具有一个亲本遗传性状的是

   ①细胞和组织培养 ②细胞融合   ③动物胚胎移植   ④核移植

请回答下列有关胚胎工程和基因工程等方面的问题：

（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞讲行核移植的原因是                               。在哺乳动物的核移植实验中,一般通过             (物理方法)将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，将胚胎植入同种的、生理状态相同的另一雌性（代孕）动物体内。为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用         技术。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理。该处理有                             两种方法。另外，培养的卵母细胞需要发育至                   ，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。

（3）在基因工程中若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，则所构建的基因表达载体必须包括:某种牛乳腺分泌蛋白基因的启动子、               、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的      (填“受精卵”或“乳腺细胞”）。若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用               技术。

猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因可抑制肌细胞的增殖和分化。CRISPR/Cas9是一种最新出现的基因编辑技术，其主要过程是向导RNA(gRNA，含与目的基因部分序列配对的单链区)与Cas9核酸酶结合，引导Cas9核酸酶对DNA局部解旋并进行定点切割。科研人员利用该技术定向敲除猪胎儿成纤维细胞中MSTN基因，以期获得生长速度快、瘦肉率高的新品种。过程如下图，其中BsmBⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ表示相应限制酶的识别位点。分析回答：

(1)图中①过程用到的工具酶有________，图中gRNA基因序列设计的主要依据是_  _。

(2)科研人员可利用____                ____(方法)将重组质粒导入猪成纤维细胞，经_______           _过程合成Cas9核酸酶。

(3)过程③与DNA复制相比，特有的碱基配对方式有___________      ___。

(4)分析发现某基因敲除细胞株中MSTN基因的表达水平为正常细胞的50%，说明__________________。

(5)欲利用MSTN基因缺失成纤维细胞培育成MSTN基因缺失猪，请简要写出基本的流程。________________                                               ___。